[发明专利]利用藏红花培养能够生产藏红花素的多倍体细胞的方法

摘要

本发明涉及一种利用藏红花培养能够生产藏红花素的多倍体细胞的方法，首先在培养基中加入细胞生长素、细胞分裂素，再加入蔗糖，用酸或碱调pH值，加入琼脂，成为基本培养基；再将藏红花的叶鞘消毒后作为外殖体。接种在基本培养基上，在培养基中加入细胞分裂抑制剂，培养出悬浮单细胞系；最后加入氨基酸、诱导子、代谢前体和辅酶，即可获得本发明的产品。本发明的产品可以制成新型抗癌药物，也能够制成预防肿瘤发生的保健品。

主权项

1、一种利用藏红花培养能够生产藏红花素的多倍体细胞的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)在常用植物组织培养基中，按每升培养液加入0～10mg/L细胞生长素或0～10mg/L细胞分裂素，再加入20～60g/L蔗糖，用酸或碱将其pH值调整到5～7，加入7～10g/L琼脂，经过加温溶解后，分装在试管中，经过105～125℃高温，0.1～0.15MPa压力下消毒后，经冷却作成基本培养基；(2)将藏红花的叶鞘用70％的乙醇和3％～10％的次氯酸钠消毒后作为外殖体。接种在上述基本培养基上，在20～25℃，黑暗条件下培养20～40天，形成愈伤组织；(3)重新配制上述基本培养基，在培养基中加入细胞分裂抑制剂，加入量为10-100mg/L，将上述的第二步诱导出的愈伤组织接种在该培养基上，在20～25℃，避光条件下培养10～20天；(4)将第三步的愈伤组织细胞放在上述第一步但不加琼脂的基本培养基中，在20～25℃，避光条件下，在90rpm摇瓶机上旋转培养10～20天，培养出悬浮单细胞系；(5)将第四步培养出的悬浮单细胞均匀接种在平板基本培养基上，在20～25℃，避光条件下培养20～30天，形成新的细胞团，然后用染色剂染色后，用高倍显微镜观察其染色体数目，挑选出多倍体细胞系；(6)配置基本培养基，并分别加入氨基酸1～100mg/L、诱导子1～100ml/L、代谢前体10～200mg/L、辅酶0.1～10mg/L，将第五步获得的多倍体细胞接种在该培养基中，在20～25℃，避光条件下培养20～30天，即可以从收获细胞中分离到藏红花素。