[发明专利]烟草发状根培养法生产烟碱

摘要

本发明涉及烟草发状根培养法生产烟碱。用发根农杆菌侵染烟草无菌苗的外植体，诱导该外植体长出发根；用Southern杂交检测根系中的T-DNA，以确定发状根株系；培养具有T-DNA的根系，用固定化连续培养法，在改良的MSO培养基中培养该最优发状根系，最后从培养基和发状根中提取烟碱。

主权项

1.高含量烟碱的转基因烟草发状根的制备方法，其特征在于该方法包括：A.获取烟草无菌实生苗：将烟草种子作消毒处理，点播于盛有固体MSO培养基的培养皿中，待发芽后转接于盛有固体MSO培养基的100ml三角瓶中，待苗长至3～5周即可作侵染用；B.侵染：取下烟草无菌实生苗的叶柄，用移液器向叶柄切口处点上少量A4农杆菌菌液，将侵染有菌液的烟草叶柄放在盛有MSO固体培养基的培养皿上培养，待其长出1cm左右长的发根；C.除菌：待被侵染的叶柄长出1cm左右的根后，用头孢毒素或羧苄霉素除去农杆菌。继续培养，当根长至2～3cm时将其从叶柄上切离，转至固体MSO的培养基上，在40℃下培养2天，至完全除菌；D.继代：将除菌的单根在固体MSO培养基中培养。2～3周继代一次，使其量不断扩增，得到一定量的系列根系；E.鉴定：用Southern杂交的方法检测步骤D中得到的系列根系，确定出含有T-DNA的根系，此根系即为转基因的发状根。