[发明专利]固定化金属离子亲和层析胶的制备技术

摘要

本发明是一种固定化金属离子亲和层析胶的制备技术，用Sepharose 6B和亚氨基二乙酸(IDA)作为主要原料，经活化、接臂、固定等反应合成出Ni²⁺亲和层析胶，在纯化带有His-tag标记的蛋白质时非常有效。经理化指标及分离蛋白质的功能检测结果表明，该固定化金属离子亲和层析胶与国际上相应产品的理化指标及分离蛋白质的功能等都完全一致。但是胶的价格预测只相当于目前国际市场价格的1/10左右。

主权项

1、一种固定化金属离子亲和层析胶的制备技术，其特征是将50g载体Sepharose 6B或Sepharose4B用G-3漏斗抽干，放入一个三角烧瓶中，加入1-2倍载体胶体积的溴化氰或环氧氯丙烷，用NaOH调pH值为6.5-12，再加入0.0375g NaBH4，在22℃-60℃搅拌反应1-2小时后，加入10ml 0.2MNaOH及5ml CHBr或加入10ml 0.2MNaOH及5ml环氧氯丙烷，间隙搅拌5-12小时，使胶充分活化；活化好的载体胶于G-3漏斗上抽干，再放回三角烧瓶中，加入亚氨基二乙酸，用0.2M Na2CO3溶液调在pH为6.5-12的条件下，与手臂亚氨基二乙酸搅拌反应，反应温度是30℃-50℃，反应2-6小时，反应完的胶用G-3漏斗抽干，抽干的胶回转至三角瓶中，用2-5倍体积1M的NiSO4溶液与之反应；反应条件为30℃-50℃，搅拌反应3-5小时，把胶在G-3漏斗上充分抽干，用稀乙酸淋洗2-3次，再用双蒸水淋洗2-3次，抽干；用20％的乙醇保存于4℃冰箱备用。