[发明专利]人体心肌肌钙蛋白Ⅰ的纯化方法无效
| 申请号： | 00112156.1 | 申请日： | 2000-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN1165548C | 公开（公告）日： | 2004-09-08 |
| 发明（设计）人： | 张寄南;苏恩本 | 申请（专利权）人： | 上海润东生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K16/18;C12Q1/28 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 | 代理人： | 俆冬涛 |
| 地址： | 上海市浦东桃*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了人体心肌肌钙蛋白I的纯化和其单克隆抗体的制备方法以及一步法测定其含量的方法。其特点是采用亲和层析法纯化人体心肌肌钙蛋白I，利用该纯化的心肌肌钙蛋白I与BALB/c小鼠免疫制备该心肌肌钙蛋白I的单克隆抗体，并建立了一步法测定心肌肌钙蛋白I含量的方法。其优点是所得抗体的同源性好，特异性和敏感性高。其检测方法操作简单，成本低。可广泛用于心脏病的检查。 | ||
| 搜索关键词： | 人体 心肌 肌钙蛋白 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1、人体心肌肌钙蛋白I的纯化方法，其特征在于包含如下步骤：(1)取人体新鲜或速冻冷藏的心肌组织，去脂肪及纤维，经匀浆、离心、沉淀、抽提、高盐溶解等步骤处理后，在层析介质为CMSephadex-C50、Cellulose-DE52，缓冲体系为Tris-HCl，pH值为7.2～7.8，尿素含量为6～8mol/L条件下依次进行层析，分别收集含心肌肌钙蛋白C(cTnC)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的蛋白峰；(2)取上述步骤(1)所得心肌肌钙蛋白C，在偶联溶液为0.1～0.3mol/L NaHCO3，pH值为7.8～8.5，3～6mmol/L CaCl2，平衡缓冲液为45～55mmol/L Tris-HCl，8～10mol/L尿素，0.8～1.2mmol/LCaCl2，12～18mmol/L β巯基乙醇，pH值为7.8～8.2的条件下与Sepharose 4B亲和层析柱相偶联，制备成Sepharose 4B亲和层析柱；(3)取上述步骤(1)经CM Sephadex-C50层析后的粗提品的心肌肌钙蛋白I峰收集液，再加入步骤(2)所得Sepharose 4B亲和层析柱进行亲和层析，即得纯化的心肌肌钙蛋白I。
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