[发明专利]鱼病多联免疫检测药物盒

摘要

鱼病多联免疫检测药盒，涉及单克隆抗体制备及应用技术领域。本发明将鳗弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华菌免疫小鼠，进行细胞融合，再克隆化，制备出特异性很强，且效价较高的单克隆抗体，按一定比例配制成多联免疫检测药盒，能随时快捷、准确地检出各种鱼病，为鱼病的及时有效治疗提供保证。

主权项

1.鱼病多联免疫检测药物盒，其特征是：将鳗弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华菌的标准菌株经扩增培养后，用1％甲醛固定过夜灭活，将浓度为1×108个/毫升灭活菌液以0.5毫升/只的量，腹腔注射免疫小鼠；于第一次免疫后第7、14、28天分别追加免疫一次，第31天取脾细胞1×108 个/毫升和SP2/0骨髓瘤细胞2～3×107个/毫升进行细胞融合；将经细胞融合的细胞悬液加到辅有饲养细胞的96孔培养板中，每孔0.1毫升，在37℃，含5％CO2的孵箱中培养；用酶联免疫反应法检测阳性克隆，将确定为阳性的孔以有限稀释法，进行克隆化；将阳性克隆的杂交瘤细胞株扩增培养，将扩增培养的杂交瘤细胞调整为1×106个/毫升，以每只小鼠0.5毫升的量，腹腔注射接种到Ba/b/c小鼠，接种后7～14天，处死小鼠，吸取腹水，即为腹水型单抗；将鳗弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华菌的腹水型单抗以酶联免疫反应法进行效价、亚类及交叉试验，将这4种效价均为10-7，且不与其它弧菌及肠道其它杆菌发生交叉反应的特异性单抗以1∶1∶1∶1的比例混合，制备成鱼病多联免疫检测药盒。