[发明专利]鱼藤酮离体生物合成生产方法

摘要

本发明涉及植物离体组织培养生产有用次生代谢物的生物技术。发明包括愈伤组织诱导、愈伤组织生长培养、愈伤组织的分化合成和鱼藤酮的提取，并提出了适合离体培养细胞生长和鱼藤酮合成积累的培养基、培养条件(如光强、温度)和培养周期。发明还提出了鱼藤酮生物合成前体物在离体生物合成中的应用。通过离体培养生产鱼藤酮可以避免田间活体栽培生产途径所存在的不足，节省耕地、缩短生产时间、降低成本，而且可以不受外界环境条件的限制，达到可持续工业化生产的目的。

主权项

1.鱼藤酮离体生物合成生产方法，其特征在于鱼藤酮离体生物合成，包括愈伤组织诱导、愈伤组织生长培养、愈伤组织的分化合成和鱼藤酮的提取；(1)愈伤组织诱导：取能够产生鱼藤酮的植物，如豆科的鱼藤、山毛豆等的外植体，经灭菌消毒后，在无菌条件下，剪切成小块，置于添加有6-BA2.253μg/ml+2，4-D2.210μg/ml，琼脂0.8％，蔗糖30g/L，pH值5.8的MS基本培养基上，在光照为光∶暗＝12∶12小时，光强约为2000勒克斯，相对湿度80±5％，温度28±2.5℃的培养室内离体培养获得的愈伤组织块；(2)愈伤组织生长培养：将愈伤组织块切分后，接入经改良后的MS培养基中，在光照为光∶暗＝12∶12小时，光强约为4200勒克斯，相对湿度80±5％，温度30±2.0℃，和通气的条件下培养可获得最大的生物量；改良的MS培养基配方为：微量元素与大量元素的浓度与MS培养基一致，有机物为MS培养基中浓度的2倍，蔗糖为50g/L，0.8％琼脂，激素组合为6-BA0.225μg/ml+2，4-D6.630μg/ml，pH值为6.0；(3)愈伤组织分化合成培养：将按愈伤组织块，接入愈伤组织分化合成用培养基中，在光照为光∶暗＝12∶12小时，光强约为1100勒克斯，相对湿度80±5％，温度30±2.0℃，和通气的条件下培养，使愈伤组织分化出根和合成鱼藤酮，此后转入黑暗条件下继续培养，使离体生物合成的鱼藤酮积累；用于愈伤组织分化合成的培养基配方，其各成分与(2)的改良MS培养基相同，但激素改为0.1μg/mlNAA，pH值改为6.5；(4)离体生物合成的鱼藤酮的提取：采用有机溶剂索氏提取或浸渍提取，用一定量的有机溶剂对烘干磨碎后的离体培养物进行抽提，获得的抽提液，经过滤、浓缩，用色谱法精制获得鱼藤酮。