[发明专利]一种从动物血液中提取高纯度铜锌超氧化物岐化酶的方法

摘要

本发明涉及一种从动物血液中提取高纯度超氧化物岐化酶的方法，本方法包括如下步骤在动物血液中加入抗凝剂，去除沉淀，对上清进行3-6级的温度梯度处理，再去除沉淀，对上清液用硫酸铵进行两级不同饱和度盐析，并对最终的沉淀用缓冲液洗脱除去残留的盐析液，最后得纯度及比活都比较高的SOD酶。本发明具有操作简单、成本低、酶的收率及比活都比较高的优点。

主权项

1、一种从动物血液中提取高纯度铜锌超氧化物岐化酶的方法，步骤如下：①将新鲜的动物血液中加入重量比为0.2-0.5％的柠檬酸钠抗凝剂，低温4-8℃放置30-100分钟，待溶液分层，去掉大部分上清；②沉淀由室温迅速加温至50℃，保温15分钟后迅速降至室温，4000转/分钟离心15分钟后去除沉淀，得上清液；③温度梯度处理：对上清液进行3-6级温度梯度处理，初级温度为40-50℃，终级温度为70-80℃，每两级间温度梯度差为5-10℃，上清液每级温度梯度处理都是先由室温迅速升温至某级温度、保持10-30分钟后再迅速降至室温，每级降温后都低速4000-6000转/分钟离心10-30分钟，除去沉淀；④对上清液进行两级盐析：首先加入硫酸铵，使盐析液饱和度为45-70％，充分搅拌溶解，低温4-8℃放置12-36小时后，低速4000-6000转/分钟离心10-30分钟，去除沉淀；继续在上清液中加入硫酸铵使盐析液饱和度为85-95％，充分搅拌溶解，低温4-8℃放置12-36小时后，低速4000-6000转/分钟离心10-30分钟，收集沉淀，记为沉淀1；上清液再低温4-8℃放置12-36小时，用G4磨沙漏斗进行抽滤，收集沉淀，记为沉淀2；⑤用浓度为0.05-0.2M、pH＝7.0的磷酸钾缓冲液分别溶解步骤4的两组沉淀，10000M超滤去除硫酸铵即得比活和纯度略有不同的两组SOD酶。