[发明专利]酶法生产右旋糖酐无效
申请号: | 00130268.X | 申请日: | 2000-11-02 |
公开(公告)号: | CN1353193A | 公开(公告)日: | 2002-06-12 |
发明(设计)人: | 杨敏 | 申请(专利权)人: | 杨敏 |
主分类号: | C12P19/08 | 分类号: | C12P19/08 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 100832 北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 酶法生产右旋糖酐,分两大步。第一大步,首先生产右旋糖酐蔗糖酶又分三步A、产酶细菌的培养,B、细菌生长与繁殖,C、生产右旋糖酐蔗糖酶。第二大步为合成右旋糖酐酶,通过采用基因突变技术培育出高产优质细菌,研制一种特殊的培养基配方,使右旋糖酐蔗糖酶产量增加1倍以上,经离心除去细菌后,将酶液定量加于蔗糖缓冲液pH5.2-5.3中于23-26℃温度下,间隙搅拌18-24小时后酒精沉淀即得无菌右旋糖酐,本发明使不控的发酵过程改全新可控过程,不仅使投资和生产成本降低,质量高且产量可增20%以上。 | ||
搜索关键词: | 生产 右旋糖酐 | ||
【主权项】:
1、一种酶法生产右旋糖酐,其特征在于:包括以下步骤:1)右旋糖酐蔗糖酶的生产方法:A、产酶细菌的选育:将处于生长旺盛期的细菌肠膜状明串球菌细菌离心沉淀、洗涤之后,用浓度为100微克/毫升的硝酸胍溶液处理90分钟,然后离心沉淀,除去上清液,再用生理盐水洗涤三次,将这些处理过的细菌接种于斜面培养基上,经过反复筛选,从中挑出高产优质菌株;B、细菌生长与繁殖:将上述斜面培养基上的优质细菌接种于500毫升液体培养基中,这种培养基的组成为:蔗糖2.0%酵母膏0.5%磷酸氢二钾0.5%黄豆抽提物0.3%无机盐液0.5%加蒸馏水至100%PH7.3-7.6所述无机盐液成分为100毫升中含硫酸镁4克,硫酸亚铁、硫酸锰和氯化钠各0.2克,液体培养基在接种之前必需高压消毒,接种后置于恒温25℃水浴中培养8至12小时,即可以10倍比例继续接种在新的培养基中,并逐级放大;C、右旋糖酐蔗糖酶的生产:首先是制备一种适合细菌产酶的特殊培养基,其组成如下:蔗糖3.0%酵母膏1.0%黄豆抽提物0.3%磷酸氢二钾1.5%无机盐液1.0%,加蒸馏水至100%PH7.3-7.8所述无机盐液组成为:每100毫升中硫酸镁2克,氯化钙0.5克,其他硫酸亚铁、硫酸锰和氯化钠各0.1克,上述培养基混匀后高压清毒,冷却至23-25℃备用;生产时,在无菌条件下,按培养基体积10%比例,将上述生长旺盛期的菌液接种其中,维持温度在23-25℃左右,并间隙搅动,约24小时,测定PH及酶活性,当PH下降至4.5-5.0酶活性达高峰时,即可停止反应,放料离心,离心速度一般为3000-5000转/分,时间约15分钟,离心后将沉淀弃去,上清液收集在洁净无菌的容器中,加盖后,存放在4℃冷室备用,并测定酶活性,在4℃环境中,酶活性一般可稳定达3个月之久。2)右旋糖酐的酶法合成途径:取上述方法生产的酶液,按每毫升10个单位计算,加于蔗糖缓冲液中。
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