[发明专利]核酸网状分枝扩增技术

摘要

一种核酸网状分枝扩增技术，利用DNA多聚梅引物的延伸及分离特性，使同一种酶能完成引物延伸，及网状分枝扩增。因此，百万倍扩增可在同一温度下短时间内顺利完成。网状杂交扩增可在无酶参与情况下完成，由于靶核酸捕获，环状扩增反应，以及检测三步骤，都可在同一固体支持物上完成。从而，简化了检测方法，使其可在一般诊所，临床化验室，甚至露天中操作。网状杂交扩增技术，可用于核酸检测，以及蛋白质检测。

主权项

权力要求：一种用于检测样品中靶核酸的技术方法，即核酸网状分枝扩增技术。1、A．这种检测靶核酸方法，是利用寡聚核甘酸的探针，通过其本身的互补序列与样品中的核酸进行杂交。这种寡聚核甘酸探针是由一个或多个捕获探针、扩增探针组成。此捕获探针的3’端不与靶核酸相互补，而5’端则能与靶核酸互补和杂交。反之，如3’端与靶核酸互补和杂交，则5’端不能为之。此捕获探针具有与配体相结合的分子，而这个分子安固于支持物上。(见图1)扩增探针的3’端和5’端能与靶核酸互补及杂交，而3’端和5’端之间的核酸序列不能与靶核酸结合，由靶核酸，捕获探针，扩增探针所组成的复合体，通过其捕获探针的配体与支持物结合。此复合物可反复冲洗，以去除样品杂质。B、将扩增探针3’端和5’端首尾相互连接形成一个环形分子。C、网状分枝扩增由以下步骤实现：引物与环状扩增探针上的连接区相结合，并由DNA聚合酶沿环状扩增探针延伸，产生多个重复性单位，多个反向引物与单链DNA相结合，并可被DNA多聚酶延伸引物延伸后，使其下游的引物及其延伸的DNA与模板DNA分离。而分离的单链可作为正向引物的模板，此过程为网状分枝扩增。D、此过程循环往复，直至所有单链DNA都变成双链DNA。E、检测扩增产物时，如有产物DNA的出现，表明样品中有靶核酸存在。(见图2)