[发明专利]中国辽宁省大连蛇岛蝮蛇毒液中类凝血酶基因cDNA序列及其克隆无效
| 申请号： | 01106262.2 | 申请日： | 2001-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN1370833A | 公开（公告）日： | 2002-09-25 |
| 发明（设计）人： | 安利佳;杨青;胡学军 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/11;C12N15/52;C12P19/34 |
| 代理公司： | 大连理工大学专利中心 | 代理人： | 侯明远 |
| 地址： | 116024*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明是辽宁省大连蛇岛蝮蛇毒液中类凝血酶基因cDNA序列及其克隆,属于生物工程领域。本发明提供了来自于辽宁省大连蛇岛蝮蛇(GloydiusShedaoensis)毒液中编码类凝血酶的基因cDNA全序列及其相应的氨基酸序列;提供了含有该基因的毕赤酵母(Pichiapastoris)分泌型表达载体pPIC9K以及分别含有该载体的菌株大肠杆菌JM109/pPIC9K和毕赤酵母细胞株GS115/pPIC9K。本发明可用于基因工程方法生产重组类凝血酶,达到诊治和预防血栓类疾病的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 中国 辽宁省 大连 蛇岛 蝮蛇 毒液 凝血酶 基因 cdna 序列 及其 克隆 | ||
【主权项】：
1.中国辽宁省大连蛇岛蝮蛇毒液中类凝血酶基因cDNA序列及其克隆，其特征在于它是：通过对已知核苷酸序列的其他毒蛇毒液的类凝血酶基因进行同源性分析研究，根据同源性极高的区域设计合成四条寡聚核苷酸引物，以提取的大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA为模板，RT-PCR方法合成扩增其中的类凝血酶基因序列，以设计的内侧引物为引物，进行二次PCR，并对此PCR产物测序，由此获得了大连蛇岛蝮蛇(GloydiusShedaoensis)毒液中类凝血酶基因cDNA的全序列；同时，根据类凝血酶的cDNA全序列，设计引物，将类凝血酶基因编码的成熟类凝血酶基因克隆到表达载体pPIC9K中，并通过热击法将此载体转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中，通过电击法将此表达载体整合到毕赤酵母细胞株GS115的基因组中。
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