[发明专利]复合人工皮肤的制备方法

摘要

本发明属于对人体各部的人造代用品或替代物，具体涉及一种人工皮肤的制备方法，它包括各种溶液的配制、基质凝胶的制备和细胞的三维培养，基质凝胶由I、III型人胶原，壳多糖，硫酸软骨素，硫酸肝素，弹性蛋白，透明质酸，或/和纤维粘连蛋白组成。本发明方法制备的人工皮肤，弹性和柔韧性好，能象天然皮肤一样剪切，缝合，收缩率低，抗感染能力高，用于皮肤缺损的移植治疗效果好。

主权项

1.一种复合人工皮肤的制备方法，包括溶液的配制、基质凝胶的制备和 细胞的三维培养，其特征在于： 1)所说的溶液的配制是在无菌条件下分别配制以下溶液，A.按63∶37取 I、III型人胶原，先用胃蛋白酶消化除去胶原的末端，然后用醋酸配制浓度 为2-10mg/ml的胶原醋酸溶液，B.取壳多糖配制浓度为0.1-5.0mg/ml的壳 多糖醋酸溶液，C.用pH8.0，0.2MTris液和弹性蛋白配制浓度为0.05-5.0 mg/ml的弹性蛋白Tris溶液，D.取透明质酸、硫酸软骨素和硫酸肝素配制出 每毫升含0.002-0.3mg透明质酸，0.001-0.5mg硫酸软骨素和0.05-5.0ug硫酸 肝素的水溶液，E.用D-Hanks液和纤维粘连蛋白配制浓度0.01-5mg/ml的纤 维粘连蛋白溶液； 2)所说的基质凝胶的制备，是在冰浴中，用A溶液8份，B溶液1份，与浓缩 了一倍的内含40％新生牛血清、200U/ml青霉素、200ug/ml链霉素的DMEM 培养基10份，在已消毒的玻璃瓶中混合，加入C溶液0.5份和D溶液0.5份，混均， 然后用1NNaOH和1NHCl调节pH至7.2-7.4，再快速加入浓度为2-3×10⁵个细 胞/ml的成纤维细胞小牛血清悬液1份，快速混均后在室温下自然形成基质 凝胶； 3)所说的细胞的三维培养，是在37℃，95％空气/5％CO2和饱和湿度下的 CO2孵箱中对形成的基质凝胶进行细胞的三维培养，即在孵箱中先将基质凝 胶的成纤维细胞培养1-2周；然后换用内含10％小牛血清、表皮细胞生长因子 10ng/ml、氢化可的松0.4ug/ml、胰岛素5ug/ml的表皮细胞培养基40-80 份，按1-5×10⁵个细胞/cm²基质凝胶接种表皮细胞，浸没培养3-10天；待表 皮细胞生长融合后，用不锈钢筛网做支持，将人工皮肤升至气液界面，补加适 量表皮细胞培养基，继续培养7-14天。