[发明专利]小麦叶片直接用于聚合酶链式和随机扩增长度多态性反应有效
| 申请号： | 01108040.X | 申请日： | 2001-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN1143897C | 公开（公告）日： | 2004-03-31 |
| 发明（设计）人： | 杨剑波;汪秀峰;李莉;向太和;吴丽芳;皮桃花;倪大虎;吴家道;张盘娣;张毅 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 安徽省合肥新安专利代理有限责任公司 | 代理人： | 吴启运 |
| 地址： | 230031*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种小麦叶片经碱处理后直接作为模板用于PCR反应和RAPD反应的方法。该方法是取小麦叶片1-2cm经碱处理后直接作为PCR反应和RAPD反应的模板，并结合特定的扩增反应成份和反应程序，从而获得清晰的反应结果。该方法具有快速、简便、重复性好、对待测植株的损伤小等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 小麦 叶片 直接 用于 聚合 链式 随机 扩增 长度 多态性 反应 | ||
【主权项】：
1、一种小麦叶片直接作为模板用于PCR反应及RAPD反应，包括在DNA扩增仪上进行设置的变性、退火、延伸若干循环和反应产物的琼脂糖凝胶电泳、染色和观察，其特征在于：(1)小麦叶片经碱处理后直接作为模板用于PCR反应和RAPD反应，所述的碱处理方法如下：剪取供试小麦叶片1～2cm，放入含200μl 0.2～0.3mol/L NaOH的离心管中，将此离心管插入沸水中煮20～35秒，取出加入等当量的HCl和100μl0.5mol/L Tris-HCl，Tris-HCl的pH值为8.0，再将该管放入沸水中孵育1～3分钟，取出叶片；(2)PCR反应和RAPD反应中加入如下组成和浓度的反应缓冲液：10～20mmol/L(NH4)2SO4、1.5～3.0mmol/LMgCl2、50～80mmol/L Tris-HCl，Tris-HCl的pH值为8.8。
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