[发明专利]一种固体发酵批量培养枯草芽孢杆菌变异菌株的方法

摘要

一种固体发酵批量培养枯草芽孢杆菌变异菌株的方法，属生物材料培养技术领域，操作包括配制固体培养基、灭菌、接种培养，收获活菌四个步骤，有收集湿菌体不需专门的离心机，即设备投资低、收获的活菌数多和无废液排放和环境污染问题的优点，适于用来批量培养枯草芽孢杆菌变异菌株的湿菌体，为工业化生产复合型活菌生物净水剂提供活菌原料，是一项能促进水产养殖的新技术。

主权项

1.一种固体发酵批量培养枯草芽孢杆菌变异菌株的方法，其特征在于，操作步骤：第1步配制固体培养基，按该培养基的重量百分比配方，黄豆并粉2～60％、玉米并粉2～60％、米糠2～40％、麸皮2～40％、硫酸铵0.4％和氯化铵0.2％，称取固体原料，将硫酸铵和氯化铵溶于重量为固体原料总重量的30～40％的水中，再与其余固体原料混和，搅拌均匀，均分为四份，分别投入四个固体发酵罐，制成相同的固体培养基四罐；第2步灭菌，在压力、温度和发酵罐转速分别为1.05～1.3kg/cm2、121～125℃和6～60rph，即转/小时的条件下，对四罐固体培养基进行高压灭菌处理，处理时间为30～60分钟；第3步接种培养，罐温降至40～50℃时，在发酵罐旋转的情况下，向每罐喷入重量为每罐中固体原料重量的30～40％的无菌水，当罐温降至30～40℃时，将预先经二级培养成的处于对数生长期的枯草芽孢杆菌变异菌株1#、2#、3#和4#的细菌种子分别接入上二步所述的四个发酵罐，每罐的接种量为每罐固体原料重量的2～3％，在罐压、通风量、发酵罐转速和罐温分别为0.2～0.8kg/cm2、1600～2000L/h、6～60rph和30～40℃的条件下，对四罐变异菌株连续发酵培养20～50小时；第4步收获活菌，经上步处理，上述变异菌株大量繁殖，从四个发酵罐分别收获大量枯草芽孢杆菌变异菌株1#、2#、3#和4#的湿菌体，每种湿菌体的重量大致与投入每罐内固体原料和水的重量相等，每克湿菌体含活菌数20亿～50亿个。