[发明专利]中国石斛属植物及其药材的DNA分子鉴定方法

摘要

本发明涉及中国石斛属植物及其药材DNA分子鉴别的方法。在建立了中国石斛属植物rDNA ITS区全序列数据库的基础上，对待检植物或药材样品进行了总DNA提取、PCR扩增、PCR产物纯化、DNA序列测定、分析等过程。当待检植物或药材与数据库中某石斛属植物的DNA序列相符时为该种石斛。根据中国石斛属植物rDNAITS区的数据库，设计出鉴别铁皮石斛的高特异性鉴别引物，能成功进行铁皮石斛原植物及药材的高特异性PCR鉴别。

主权项

铁皮石斛原植物及药材的高特异性PCR鉴别方法，其特征是对照所测中国石斛属植物的DNA序列数据库，设计出鉴别铁皮石斛的高特异性鉴别引物，铁皮石斛鉴别引物为：上游鉴别引物TP-JB01S：5’-GTGCTGCTGAGATAAAATCCACTG-3’，下游鉴别引物TP-JB01X：5’-CCACCATGCACATCCGAGCCTTAGT-3’；具体步骤为：(1)总DNA提取取待检植物新鲜的茎、叶片或药材，用无菌水处理后，在液氮中研成粉末，用QIAGEN试剂盒、CTAB法以及其它方法提取总DNA；(2)模板DNA的质量检测运用引物P1、P2，序列如下：P1为5’-CGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAAC-3’，位于18S上；P2为5’-TTATTGATATGCTTAAACTCAGCGGG-3’，位于26S上，利用该引物对总DNA进行PCR扩增反应，对待检品总DNA进行扩增，以验证模板DNA的质量、调整模板DNA的浓度；(3)运用鉴别引物TP-JB01S，TP-JB01X对模板DNA进行扩增；将退火温度升至66℃，能被扩增出来的即是铁皮石斛，而其它石斛均为阴性。