[发明专利]从长春花中提取抗癌活性成份的工艺

摘要

本发明属天然药物技术领域。具体涉及从长春花中提取具有抗癌作用的活性成份的新工艺。本发明在萃取溶剂中添加一定量的酒石酸或无机酸，从酸中分离到长春碱和长春新碱，从酸不溶物中分离到熊果酸。本发明工艺成本低，宜于工业化生产。

主权项

1.一种从长春花中提取长春碱、长春新碱和熊果酸的工艺，其特征在于该工艺包括下列方法：(1)将长春花全草干料粉碎物，用少量水拌和后投入预先装好苯的渗漉桶中，生药粉与苯的比例为1∶5-10，加盖浸提1-3天后开始渗漉，收集苯渗漉液；在上述苯渗漉液中加入3-10％酒石酸溶液作液一液逆相萃取，使长春碱和长春新碱以酒石酸盐形式转入酸水中，而熊果酸仍留于酸化的苯液中，将苯液浓缩后加氯仿萃取，滤过，再经减压浓缩后得氯仿浓缩物；然后，分批加样于硅胶层析柱上，用正己烷/乙酸乙酯为1/1洗脱，洗脱液经减压浓缩至干，加氯仿使溶，用活性炭脱色，过滤，将滤液抽干，加无水乙醇，即得白色熊果酸结晶；酸水液先用氨水调pH至6.5，加氯仿萃取，氯仿层减压蒸干，再用甲醇溶解，滤去不溶物，滤液蒸干后即为含长春碱和长春新碱的粗品；粗品加少许无水乙醇溶解，再用5％硫酸无水乙醇调pH至3.8到4.1，放置过夜，其析出物即为长春碱和长春新碱硫酸盐混合物；将上述混合物加蒸馏水溶解，用氨水碱化，加氯仿萃取，再用无水硫酸钠脱水后，上氧化铝层析柱层析，用苯-氯仿混合溶剂洗脱，分段收集洗脱液，簿层层析法检测，合并相同流份，减压抽干，从柱层析前段洗脱液中即得长春碱，后段洗脱液中即得长春新碱；或(2)收集长春花叶、晒干、粉碎，倒入提取缸中，加80％甲醇至高出料面1-2cm，在提取缸夹套中通入蒸汽，使料液温度上升至溶液沸腾，沸腾蒸汽经冷凝回流至提取缸，如此回流提取3hr，离心后得萃取液，萃取液经真空减压浓缩得甲醇提取物，同时回收甲醇；在甲醇提取物中添加1NH2SO4，使pH至3-4，并不时搅拌，静置后离心，得酸不溶物和酸溶物，酸溶物按照公知方法提取长春碱和长春新碱，上述酸不溶物可用5倍量氯仿萃取熊果酸，再经硅胶柱吸附，用环己烷/乙酸乙酯为10-6/1-3洗脱，洗脱液浓缩后，其浓缩液可在无水乙醇中沉淀得白色熊果酸结晶；或(3)长春花全草或叶或地上部分用热乙醇提取，乙醇浓度70-95％，在长春花的乙醇提取液中添加有机酸或无机酸，使pH达3-4，即得酸溶液和酸不溶物；酸溶液用氨水调碱后加苯萃取，萃取液减压蒸干后上硅胶柱层析，用正己烷/乙酸乙酯洗脱液洗脱，同时用薄层层析监控，洗脱液分段浓缩蒸干后加含4％硫酸的无水乙醇，即可从前段流份中析出得长春碱硫酸盐，从后段流份中析出得硫酸长春新碱；酸不溶物加甲醇萃取，萃取液减压浓缩至干后作硅胶色谱柱分离，先用石油醚淋洗，再用含有2％乙醇的石油醚洗脱，并作薄层层析监控，收集合并含熊果酸的流份，浓缩蒸干后加热乙醇溶解并置于低温下，即有熊果酸结晶析出。