[发明专利]山楂SOD的提取方法

摘要

本发明涉及一种SOD酶的提取技术。本发明的山楂SOD粗酶可以通过硫酸铵沉淀法或膜分离法获得,其主要工艺流程为山楂果经组织捣碎后,离心,将粗提液用30%硫酸铵沉淀,采用膜系统过滤获得滤液;获得的滤液用90%硫酸铵沉淀,将沉淀溶于缓冲液中,然后SephadexG－25脱盐,获得粗酶提取液;将脱盐后的粗酶提取液加入到SephadexG－100柱中进行柱层析,采用全自动分布收集系统收集洗脱液,合并SOD活力高的收集液;进一步透析,冷冻干燥,获得高酶活SOD粗酶制剂。实验证明,本发明具有原料廉价易得、酶活性高、回收率高的优点。

主权项

1、一种硫酸铵沉淀法提取山楂SOD酶，其特征在于提取步骤为：(1)原料预处理新鲜山楂果，通过组织捣碎机捣碎成浆，置于4000-6000rpm离心机离心10-30分钟，弃沉淀残渣，获得上清液作为粗提液；(2)30％硫酸铵沉淀将粗提液加入硫酸铵，使粗提液中硫酸铵达到30％饱和度，在室温(23-25℃)下搅拌55分钟，采用膜系统过滤获得滤液；(3)90％硫酸铵沉淀在30％硫酸铵沉淀后的滤液中，加入硫酸铵使其饱和度达到90％，在室温下搅拌60分钟，置于10000-15000rpm离心机离心20-40分钟，将沉淀溶于最小量的5mMpH7.8磷酸缓冲液中(含2mMEDTA)，然后用上述缓冲液和SephadexG-25脱盐；(4)SephadexG-100柱层析SephadexG-100柱，预先用pH7.8、5mM的磷酸钾缓冲液平衡；将脱盐后的粗酶提取液加入到柱中，并用上述缓冲液洗脱，采用全自动分布收集系统收集洗脱液，合并SOD活力高的收集液。