[发明专利]一种精氨酸酯酶的制备方法

摘要

本发明涉及从江浙蝮蛇毒中提取肝活素的方法，这种肝活素的主要成分为精氨酸酯酶，其药理功能是降低血粘度，改善微循环，对肝炎病毒感染细胞的发展有抑制作用，能促进肝功能的恢复。由于江浙蝮蛇毒中含有神经毒素和出血毒素等有害成分，本发明的方法是利用经过三柱层板分离纯化，能将这些毒性物质除掉，精氨酸酯酶的含量达90％以上。动物试验表明毒性很小，试验剂量为临床用量的数十倍，因而可保证临床用药安全。

主权项

1、一种精氨酸酯酶的制备方法，其特征是该方法包括如下步骤：步骤a：取江浙蝮蛇毒冻干粉溶于0.05Mtris-HCl，pH7.8缓冲液中，4℃下离心除去不溶物，取上清液；步骤b：上清液先经DEAE纤维素DE-52柱层析，层析柱先用Tris-HCl缓冲液平衡后，用含NaCl的缓冲液从0至0.5M进行梯度洗脱，收集含精氨酸酯酶活性的组分，浓缩，去盐后，进行下一步分离；步骤c：用CM-Sepharose柱层析分离，平衡液是0.05M醋酸钠pH5.0缓冲液，洗脱液含0至0.5MNaCl pH5.0的醋酸钠缓冲液梯度洗脱，收集含精氨酸酯酶活性组分，浓缩，去盐后再做下一步分离；步骤d：用Sephadex-75柱层析疑胶过滤分离，洗脱液为0.05M NaHCO3含0.1M NaCl溶液，收集精氨酸酯酶组分，浓缩，去盐，冻干后得产品。