[发明专利]用固定化酯制备手性二氯菊酸的方法

摘要

一种固定化酯酶制备手性二氯菊酸的方法，由酯酶共价结合到双功能基活化的固体载体上，将消旋的二氯菊酸酯、非离子表面型表面活性剂和固定化酯酶加入到缓冲溶液中进行催化水解反应，将固定化酯酶与反应液分离，固定化酯酶用缓冲液冲洗后保存备用，反应液用浓盐酸酸化后，用有机溶剂萃取；有机相用碱水皂化，使反应生成的二氯菊酸进入水相，再用浓盐酸酸化，析出结晶。该方法明显地提高了酶反应速度和对手性二氯菊酸的选择。制备的固定化酯酶可以反复使用。

主权项

1、一种固定化酯酶制备手性二氯菊酸的方法，以消旋的二氯菊酸酯为原料，其结构式如下：式中，R为C1-C4烷基或孟基，其顺式与反式比例在10-90/90-10范围内；其制备步骤如下：1)制备固定化酯酶：由酯酶共价结合到双功能基活化的固体载体上：其中，酯酶(EC.3.1.1.1)由新鲜的哺乳动物的肝脏或细菌以及酵母中提取，活力不低于0.1U/mg；双功能基活化试剂为双醛、双醚、双酚、双酸或双环氧；固体载体为硅胶、氧化铝、有机树脂或天然多糖；2)将消旋的二氯菊酸酯、非离子表面型表面活性剂和固定化酯酶加入到pH＝3-11的缓冲溶液中，搅拌或振荡下进行催化水解反应，并通过加碱保持其pH值；水解反应温度为20-70℃，反应时间为6-96小时；其中，消旋的二氯菊酸酯在反应溶液中浓度为0.1-40％；固定化酯酶用量在5-500U/g消旋的二氯菊酸酯；非离子型表面活性剂为蓖麻油聚氧乙烯、脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、失水梨糖脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯或蔗糖脂肪酸酯，其浓度范围为0.001-0.2％；缓冲液为无机盐或有机盐缓冲溶液；3)将固定化酯酶与反应液分离，固定化酯酶用缓冲液冲洗后保存备用，反应液用浓盐酸酸化后，用有机溶剂萃取；4)有机相用碱水皂化，使反应生成的二氯菊酸进入水相，再用浓盐酸酸化，析出结晶。