[发明专利]在绿色植物中高水平地生产对羟基苯甲酸

摘要

本发明涉及用独特的表达盒在绿色植物中高水平地生产pHBA。所述表达盒包含一个与能够在高等植物中驱动蛋白表达的合适启动子有效连接的分支酸丙酮酸裂合酶(CPL)编码序列。另外，所述CPL盒包含编码叶绿体转运肽、其天然切割位点和与CPL的N末端融合的所述转运肽供体蛋白一小部分的序列。所述叶绿体靶向序列使外源蛋白靶向叶绿体区室，有助于其被摄入到该细胞器中。所述切割位点对于所述转运肽是唯一的，在该位点切割所述盒编码的嵌合蛋白释放出一种新型多肽，所述新型多肽具有全酶活性，包含成熟CPL酶和所述转运肽供体的一小部分。

主权项

1.一种在绿色植物中生产对羟基苯甲酸的方法，所述方法包括：a)提供一种绿色植物，所述绿色植物具有内源分支酸源并且含有具有以下结构的分支酸丙酮酸裂合酶表达盒：P-T-C-D-CPL其中：P为适合于驱动分支酸丙酮酸裂合酶基因表达的启动子；T为编码核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶(Rubisco)叶绿体转运肽的核酸分子；C为编码Rubisco叶绿体转运肽切割位点的核酸分子；D为编码Rubisco叶绿体转运肽供体多肽N末端部分的约4-20个连续氨基酸的核酸分子；和CPL为编码成熟分支酸丙酮酸裂合酶蛋白的核酸分子；其中P、T、C、D和CPL中的每个有效连接，使得所述盒的表达导致一种嵌合蛋白的翻译，所述嵌合蛋白包含与成熟分支酸丙酮酸裂合酶蛋白N末端融合的叶绿体靶向序列；b)培育所述植物，其培育条件使得所述嵌合蛋白可被表达并且被转运至叶绿体，以供将分支酸转化为对羟基苯甲酸葡糖苷和对羟基苯甲酸衍生物；c)从所述植物中回收对羟基苯甲酸和对羟基苯甲酸衍生物；和d)将所述对羟基苯甲酸葡糖苷和对羟基苯甲酸衍生物加工为游离对羟基苯甲酸。