[发明专利]从地龙体内提取超氧化物歧化酶的方法

摘要

本发明涉及一种从生物体内提取超氧化物歧化酶的工艺制备方法。该方法的制备步骤为：将活蚯蚓洗净，湿磨，得到的蚓汁经过冷冻、在缓冲液中匀浆、搅拌，离心，弃沉淀物得清液；上述清液进行加热，冷却，过滤后滤液中加入丙酮，沉淀物用缓冲液溶解，弃沉淀物得上清液；上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn，然后离心，弃去沉淀，向上清液中加入硫酸铵溶液，离心收集沉淀；将上述沉淀溶解在缓冲液中，接着透析至无SO2－4，透析液最后上层析柱收集洗脱液，浓缩、冷却、干燥，即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。本发明的目的是提供一种从地龙的体内提取超氧化物歧化酶的方法，以解决消耗资源大、提取SOD成分低等方面存在的问题。

主权项

1、一种从地龙体内提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：该方法的制备步骤如下：a、将活蚯蚓洗净，置于新鲜水中或含不超过0.3％(以重量计)的有机酸钠盐中清洗，直至其消化道内的污物被彻底清除，然后在除去其表面躯体上的所有污物；b、将活蚯蚓湿磨，得到的蚓汁在-60℃～-10℃的温度下冷冻后储存；c、新鲜的蚓汁或其冷冻物在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液中匀浆2L/kg，搅拌1～2小时，15000r/min离心30分钟，弃沉淀物得清夜；d、上述清夜于65℃加热10～20分钟，冷却至4℃，过滤后滤液中加入1.25倍体积的丙酮，收集沉淀，沉淀物用少量的PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液溶解，弃沉淀物得上清液；e、上清液在搅拌下加入内含10molmg、10molCu、10molZn，饱和度达45％，继续搅拌15分钟，然后在2000r/min离心30分钟，弃去沉淀，向上清液中继续加入硫酸铵溶液，使其饱和度达65％，离心收集沉淀；f、将上述沉淀溶解在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液中，接着透析至无SO2-4透析液最后上DEAE-SephadexA-50层析柱(柱床体积为2.5×50cm)，收集洗脱液，浓缩、冷却、干燥，即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。