[发明专利]硫化矿浸矿菌株的原生质体融合技术

摘要

本发明涉及一种硫化矿浸矿菌株的原生质体融合技术。本发明采用双灭活原生质体融合技术，将氧化亚铁的氧化亚铁微螺菌、氧化还原硫的氧化硫硫杆菌以及对亚铁和还原硫都具有氧化能力的氧化亚铁硫杆菌分别进行原生质体融合，获得融合重组细菌。与基因工程技术相比，本发明技术相对简单，周期短、成本低；而与诱变育种比较，融合菌株的遗传性状改变显著，可以使融合细菌获得多种所需要的优良性状；本发明筛选出的融合细菌兼具两种亲本细菌的性状且能够稳定遗传，具有较强的氧化亚铁和氧化还原硫的能力，特别适合于低品位黄铜矿等难处理硫化矿的处理。

主权项

1.一种硫化矿浸矿菌株的原生质体融合技术，其特征在于：本发明采用双灭活原生质体融合技术，将氧化亚铁的氧化亚铁微螺菌、氧化还原硫的氧化硫硫杆菌以及对亚铁和还原硫都具有氧化能力的氧化亚铁硫杆菌分别进行原生质体融合，获得融合重组细菌，主要包括：(1)原生质体制备将亲本菌株分别加入高渗培养液中，于细菌最适生长温度20～30℃振荡培养至对数生长期，然后加入乙二胺四乙酸，半小时后再加入青霉素再培养1～5小时终止培养，离心收集菌体，用高渗缓冲液洗涤后，加入适量溶菌酶液于42℃水浴保温，并且不时摇动，离心洗涤除去酶液获得原生质体；(2)原生质体双灭活、融合及再生将原生质体浓度调整在107个/毫升，各取4～5毫升分别置于100℃热水浴中灭活，将灭活后的原生质体等量混合，离心去上清液，加入预热的融合剂于42℃保温，离心去除融合剂，加入高渗缓冲液，稀释涂布于固体再生培养基中，30℃培养7～8天，可以进行融合细菌的再生；(3)子代融合细菌的筛选分别以含还原硫和亚铁的选择性固体培养基筛选出能够稳定遗传的子代融合细菌集落。