[发明专利]利用海藻酸钙固定化德氏假单胞菌R－8进行油品脱硫的方法

摘要

本发明涉及的利用海藻酸钙固定化德氏假单胞菌R－8进行油品脱硫的方法，其步骤如下：1.保藏号为CGMCC0570的德氏假单胞菌R－8对数生长期或静止期细胞的制备；2.用海藻酸钙包埋所获得的德氏假单胞菌R－8菌体；3.增殖培养所得固定化细胞；4.油品的脱硫；5.按步骤4中的油品脱硫方法重复步骤4的过程；该方法的固定化细胞活性高、稳定性好、易于回收生物催化剂重复使用，并可避免游离细胞脱硫反应所产生色素对油品的污染；海藻酸钠价格便宜，生物相容性好。故本法工艺简单，生产成本低，并易于在工业上应用。

主权项

1.一种利用海藻酸钙固定化德氏假单胞菌R-8进行油品脱硫的方法，其工艺步骤如下：1)保藏号为CGMCC0570的德氏假单胞菌R-8对数生长期或静止期细胞的制备：挑取1～2环斜面保存或0.5～1毫升甘油保存的德氏假单胞菌R-8菌株，加入到体积为20～50毫升的培养基中，在30℃，170r/min的条件下培养1～2天后，再将培养后的德氏假单胞菌R-8菌株接种至含150ml上述培养基的500ml三角瓶中，摇床或发酵罐培养，5000rpm离心6min获得德氏假单胞菌R-8对数生长期或静止期细胞；将收集到的细胞用生理盐水洗涤2～3次，所得菌体悬浮于生理盐水中，得保藏号为CGMCC0570的德氏假单胞菌R-8菌体的生理盐水菌悬液；在4℃冰箱中放置待用；所用培养基组成如下：去离子水1000ml，KH2PO42.44g；Na2HPO4·12H2O12.03g；NH4Cl2.0g；MgCl2·6H2O0.4g；CaCl2·2H2O0.001g；FeCl3·6H2O0.001g；MnCl2·4H2O0.004g；甘油10g和硫源，所述硫源为二苯并噻吩，硫酸钠或二甲基亚砜；2)用海藻酸钙包埋所获得的保藏号为CGMCC0570的德氏假单胞菌R-8菌体：称取海藻酸钠溶于去离子水、生理盐水或增殖培养基中，制成质量百分比浓度为2～6％海藻酸钠水溶液，然后与等体积含德氏假单胞菌R-8菌体的生理盐水菌悬液均匀混合；将此混合液用针筒、滴定管或其它装置挤入0.1～2MCaCl2水溶液中，形成直径为1～5mm用海藻酸钙固定化的保藏号为CGMCC0570的德氏假单胞菌R-8细胞的小球；室温下固化0.5～2h，冰箱放置过夜；所用增殖培养基组成如下：去离子水1000ml，KH2PO40.24g；Na2HPO4·12H2O1.20g；NH4Cl2.0g；MgCl2·6H2O0.4g；CaCl2·2H2O0.001g；FeCl3·6H2O0.001g；MnCl2·4H2O0.004g；甘油10g；3)增殖培养上述固定化细胞：将第2步中所制得的海藻酸钙固定化的保藏号为CGMCC0570的德氏假单胞菌R-8的固定化细胞从冰箱取出，用去离子水或生理盐水洗涤3～4次，然后使其悬浮于固定化细胞增殖培养基中，硫源为0.1mmol/L二苯并噻吩；于30℃，170r/min条件下摇床培养1～2天；4)油品的脱硫：取增殖培养活化后的海藻酸钙的保藏号为CGMCC0570的德氏假单胞菌R-8固定化细胞，倾去培养液，加入含硫油相和水相，进行脱硫反应，水相的体积占油水相总体积的0～50％。当硫含量降到0～30ppm以后，将油水相同固定化细胞分离；所述水相为生理盐水或增值培养基。