[发明专利]一种阴离子型层状材料固定化酶及其制备方法

摘要

一种阴离子型层状材料固定化酶及其制备方法，这种固定化酶是将酶分子通过插入类水滑石层板之间的客体分子和交联剂，被固定在类水滑石层板之间。其制备方法是将含有羧基和氨基基团，且羧基数量大于等于氨基数量的客体分子通过插层方法组装进入阴离子型层状材料－类水滑石层板之间，再加入交联剂和酶，在交联剂作用下客体分子上的氨基基团与酶分子上的氨基基团形成共价键，酶分子被固定于水滑石层间得到固定化酶层柱材料。该固定化酶因受层板内几何结构的限制，反应时底物和产物在由层柱材料构筑的反应平台上进行有序转换，而酶分子不会流失，且具有较好的稳定性。

主权项

1.本发明涉及一种阴离子型层状材料固定化酶的制备方法，其特征是按以下步骤制备该固定化酶：A：制备层板二价、三价金属阳离子摩尔比为1.6-4.5∶1的类水滑石，取一定量的该类水滑石加入到盛有去离子水的容器中配制浓度为0.2-2M的悬浮液，室温下磁力搅拌，按类水滑石与客体分子完全反应计加入过量客体分子，此时容器中由浑浊液变为澄清溶液，备用；用浓度为0.01-0.5M的NaOH稀溶液，加入带冷凝和搅拌的反应器中，一边搅拌，一边滴加上述备用澄清溶液，保持滴加过程pH＞9，滴加结束后，冷凝回流约6h，过滤、用热水充分洗涤至pH＜8，于85℃左右干燥，得到层间组装了客体分子的类水滑石层柱材料；B：按从A得到的类水滑石层柱材料与水的重量比为1∶50-80的比例加入带磁力搅拌的反应器中，按该类水滑石与交联剂的重量比为1∶1-3的比例，向反应器中加入5％wt浓度交联剂，磁力搅拌1小时左右，过滤，充分水洗；将洗好的滤饼放入容器，加入去离子水和磷酸缓冲液以保护酶分子的催化活力，按类水滑石层柱材料与液体酶的固液比为1∶6-12的比例加入需固定的酶，于摇床中在一定温度下固定约20h，经离心分离，充分水洗，得到固定化酶。