[发明专利]检测家蚕及其它昆虫微粒子病的方法和试剂盒无效

专利信息
申请号: 02125360.9 申请日: 2002-07-26
公开(公告)号: CN1470872A 公开(公告)日: 2004-01-28
发明(设计)人: 秦启联;宋宪军;苗麟;李瑄;任璐;丁翠;伍一军 申请(专利权)人: 成都天友生物科技股份有限公司;中国科学院动物研究所
主分类号: G01N33/53 分类号: G01N33/53;G01N33/561;G01N33/569;C12Q1/04
代理公司: 北京律诚同业知识产权代理有限公司 代理人: 王凤华;梁挥
地址: 610000四川省*** 国省代码: 四川;51
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摘要: 发明涉及一种昆虫微粒子病(Nosema属)的诊断方法及其诊断试剂盒。具体地,本发明通过碱、二价金属离子螯合剂与去垢剂组成的DNA提取液处理样品,再经过苯酚氯仿抽提得到样品中的DNA;并根据微粒子(Nosema属)基因组中一段高度保守的DNA序列设计的引物来扩增微粒子基因组片段;通过电泳即可检测出昆虫是否受到微粒子(Nosema属)感染。本发明的方法和相关的试剂盒具有成本低、使用简便、特异性强、广谱性高等优点,并能检测出发病早期的感染昆虫。
搜索关键词: 检测 家蚕 其它 昆虫 微粒子 方法 试剂盒
【主权项】:
1.一种检测家蚕及其它昆虫微粒子病的方法,它包括步骤:(a)制备待测昆虫样品PCR反应模板:昆虫样品放入DNA提取液中,捣碎混匀,加入DNA抽提液,离心,取上清液DNA模板;DNA提取液包括1-100mM的二价金属离子螯合剂和0.1%-5%(W/V)的去垢剂,并且用碱性物质将提取液的pH值调至11-14;(b)用检测16S小亚基rRNA基因的特异性引物和步骤(a)中模板,在特异性扩增条件下进行PCR扩增;(c)对步骤(b)的扩增产物进行电泳检测,根据电泳结果判断16S小亚基rRNA基因的存在与否。
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