[发明专利]利用RNA干扰现象介导功能基因下调的腺相关病毒载体无效
| 申请号： | 02125762.0 | 申请日： | 2002-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN1475573A | 公开（公告）日： | 2004-02-18 |
| 发明（设计）人： | 吴小兵;马鑫;鲁晓春;侯云德 | 申请（专利权）人： | 本元正阳基因技术股份有限公司;病毒基因工程国家重点实验室 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/52;C12N15/86;C12N7/01 |
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| 地址： | 100176北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及用质粒携带RNAi核苷酸片段，将携带RNAi的质粒转染至体外培养的细胞内或动物体内，从而使质粒能在细胞内或动物体内源源不断地复制RNAi核苷酸片段，来达到RNAi核苷酸片段应起到的生物学作用。另外，该RNAi核苷酸片段也被包装成为一种携带了RNAi核苷酸片段的重组腺相关病毒载体，通过腺相关病毒载体进行RNAi核苷酸片段的基因转移和复制，来达到RNAi核苷酸片段应起到的生物学作用。在本发明中，构建了一个短发夹环表达质粒在BHK－21细胞中抑制荧光素酶的表达。具体方法是从人基因组DNA中设计引物用PCR调出人U6 snRNA启动子，与被9bp序列间隔的21bp荧光素酶靶序列的反向重复，以及AAV载体质粒pSNAV相连接，构建成荧光素酶RNAi表达质粒pSNAV/U6/Luc。与pMAMneoLuc质粒共转染BHK－21细胞，以及单独转染荧光素酶细胞株，分别检测对荧光素酶表达的抑制效果。实验结果显示pSNAV/U6/Luc对共转染的pMAMneoLuc中荧光素酶的表达抑制50％，而对荧光素酶细胞株中荧光素酶的表达抑制70％。抑制实验证实体内转录出的短发夹环荧光素酶能够有效抑制其在BHK－21细胞中的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 rna 干扰 现象 功能 基因 下调 相关 病毒 载体 | ||
【主权项】：
1.应用AAV载体质粒pSNAV构建携带有RNAi核苷酸转录单元重组质粒；
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