[发明专利]酵母细胞表达人白细胞介素10的方法无效
| 申请号： | 02128001.0 | 申请日： | 2002-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN1506463A | 公开（公告）日： | 2004-06-23 |
| 发明（设计）人： | 邹全明;井申荣 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/09;C12P21/02 |
| 代理公司： | 重庆华科专利事务所 | 代理人： | 康海燕 |
| 地址： | 400038重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明是酵母细胞表达人白细胞介素10的方法，技术方案是：人工合成hIL－10全基因序列，包括hIL－10的带有其信号序列和不带信号序列，分别记为shIL－10和nshIL－10，给其两端加上EcorR I和Not I酶切序列或两端都加上EcorR I酶切序列，用EcoR I和Not I分别双酶切目的基因shIL－10、nshIL－10以及毕赤酵母的整合型表达载体pPIC3.5K、pPIC9K，构建重组质粒pPIC3.5K/shIL、pPIC9K/nshIL，然后通过电穿孔、原生质体法转化毕赤酵母细胞，重组质粒和目的基因整合到酵母染色体上，应用甲醇诱导毕赤酵母进行胞内可溶性表达或胞外分泌型表达。本发明与现有在大肠杆菌中表达相比，提高人白细胞介素10的空间结构的正确折叠及其生物学活性，具有明显的优势：①酵母细胞表达hIL－10，不形成变性蛋白的包涵体，蛋白为可溶形式表达，直接形成活性蛋白；②可溶性活性蛋白有利于纯化，纯化得率高，避免包涵体复性时的损失。 | ||
| 搜索关键词： | 酵母 细胞 表达 白细胞 10 方法 | ||
【主权项】：
1.一种制造重组人白细胞介素10的方法，其特征是：应用酵母表达人白细胞介素10。
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