[发明专利]通过检测人类T细胞受体TCR基因在治疗前后的变化来评价治疗HIV药物疗效的方法有效

专利信息
申请号: 02131070.X 申请日: 2002-09-28
公开(公告)号: CN1480537A 公开(公告)日: 2004-03-10
发明(设计)人: 寇忠琛 申请(专利权)人: 北京佰仁思生物工程有限责任公司
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 北京汇泽知识产权代理有限公司 代理人: 张若华
地址: 102200北京市海*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明提供一种通过设计的特定引物来完成PCR反应,放大感染HIV病毒的患者的T细胞受体TCR基因在接受药物治疗前后的变化,进而评价药物的疗效的方法,本发明提供的技术不但填补了技术上的空白而且具有灵敏度高,准确性好的优点。
搜索关键词: 通过 检测 人类 细胞 受体 tcr 基因 治疗 前后 变化 评价 hiv 药物 疗效 方法
【主权项】:
1.通过检测人类T细胞受体TCR基因在治疗前后的变化来评价治疗HIV药物疗效的方法,其步骤为:a.血样经采集分离后,得到外周血单个核细胞(PBMC),再进一步分离出CD4或CD8T细胞;b.分离和提纯出T细胞的mRNA后,通过mRNA合成得到cDNA;c.在极其靠近CDR3区段V基因区设计24个内侧Vβ基因引物和一个侧Cβ基因引物,C区基因引物的5′端插入七个非模板碱基(GTTTCTT),Cβ基因引物采用高灵敏度的荧光(6-FAM)标记;d.将设计的引物和由mRNA合成的cDNA通过两次PCR反应来扩增cDNA;e.将经过两次PCR反应扩增并被荧光标记的T细胞受体基因,与甲酰胺混合后94℃变性,将样本置于含6%丙烯酰胺的测序凝胶中,在DNA测序机上运行,得到的数据用ABIPRISMGeneScan分析软件进行分析和量化,得出药物疗效的评价结果。
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