[发明专利]血管紧张素转换酶抑制剂亲和柱介质的制备方法

摘要

本发明涉及一种血管紧张素转换酶抑制剂亲和柱介质的制备方法，包括将新鲜猪肺匀浆，离心得上清，再进行硫酸铵分级沉淀，取沉淀进行透析、得酶液，上凝胶柱，取酶峰部分进行离子交换层析，冻干后得配体；将载体和配体按配比溶于氯化钠溶液中，调节pH，加入交联剂，室温放置，然后将样品转移入具塞容器中，持续晃动，使配体固定在载体上，将固定有配体的载体用蒸馏水和乙酸钠冲洗，最终得到80－110u/g湿重的亲和柱介质。用此亲和柱介质装入亲和柱，用于胶原蛋白酶解物的纯化，其纯化倍数为上一步的200－300倍，用于地龙、银杏等中草药中降低血压有效成分的提纯过程，其纯化倍数为160－300倍，远远高于其它的层析。

主权项

1、一种血管紧张素转换酶抑制剂亲和柱介质的制备方法，其特征是依次包括以下的步骤：A、配体的制备，将新鲜猪肺清洗后，剔除大血管、脂肪，切成碎块，加入温度为4℃、含0.25mol/L蔗糖的0.05-0.10mol/LTris-HCI缓冲液(pH7.0-7.6)，新鲜猪肺与缓冲液的重量体积比为3∶10-15，匀浆2-8分钟，在温度为4℃条件下4000-9000×g离心30-45分钟，得上清，再在温度为0℃条件下进行1.6-2.6mol/L硫酸铵分级沉淀，取沉淀进行透析、去掉硫酸铵、得酶液，将酶液上SephadexG-200凝胶柱，取酶峰部分再进行QHyperD离子交换层析，再冻干后获得比活力为1200-1400u/mg的配体；B、亲和介质的制备，将载体和A步骤制得的配体按g/mmol比例为1∶0.07-0.36的配比，溶于0.2-0.8mol/L氯化钠溶液中，调节pH3.0-9.5，加入交联剂，交联剂的加入量最终使交联剂浓度达到0.02-0.36mol/L，室温放置1-4小时，然后将样品转移入具塞的容器中，在温度为35-40℃的条件下持续晃动12-20小时，使配体固定在载体上，将固定有配体的载体先用适量蒸馏水冲洗，再用含有0.5-1.5mol/L氯化钠的20-100mmol/L乙酸钠冲洗，再继续用适量蒸馏水冲洗，最终得到80-110u/g湿重的亲和柱介质，所述的载体包括交联葡聚糖类、甲壳糖类、琼脂糖类或纤维素类，交联剂包括戊二醛、溴化氰、碳二亚胺及其衍生物、N-羟基磺酰琥铂酰亚胺或β-硫酸酯乙砜基苯胺。