[发明专利]灰树花的发酵工艺及其多糖肽的生产方法

摘要

本发明属生物工程技术领域。本发明提供了一种灰树花的发酵工艺及其多糖肽的生产方法。本发明的方法是将从腐木上组织分离的灰树花GF103菌株纯化后，采用物理法对其菌丝体进行诱变，经初筛和复筛后，获得液体发酵菌丝体生物量多、多糖肽产量高的优质菌株GF103－21。用天然黄豆粉、麸皮、葡萄糖或蔗糖、酵母粉、玉米浆、硫酸镁、磷酸二氢钾等作为培养基，从斜面菌种，到摇瓶种子，一级种子、二级种子，到发酵培养的发酵工艺流程，获得含菌丝体及多糖肽较高的灰树花发酵液。从GF103－21的菌丝体中，用热水提取，乙醇沉淀等方法，获得一种具有生物免疫调节剂作用的灰树花多糖肽。

主权项

1、一种灰树花的发酵工艺及其多糖肽的生产方法，其特征在于该方法包括下列步骤：(1)灰树花的育种：用组织分离法获得灰树花纯菌株GF103，将其接种在PDA或麦芽汁固定斜面培养基上，于25～28℃恒温培养7～10天后，置于4℃左右的冰箱中保存备用，采用紫外诱变法对菌丝细胞进行诱变，紫外照射距离为20～30cm，照射时间为5～15秒，初筛诱变株在固体培养基上的菌丝体生长能力，复筛诱变株在液体培养基中菌丝体生长量和多糖肽产量，获得优质菌株GF103-21；固体培养用70～78％的甘蔗渣或木屑、棉子壳，1％的蔗糖或葡萄糖，20％～28％的麸皮或米糠，1％的石膏或碳酸钙，加水拌匀，含水量60％，PH自然，瓶装，在1.5kg/m2的压力下灭菌1小时，冷却后，在无菌操作下摇瓶种子接种于固体培养基内，培养温度22～26℃，20～30天菌丝体布满全瓶，原基萌发后，降低栽培温度至18～24℃，保持适当湿度、光照和通风，20～25天后，子实体成熟；(2)菌株的发酵摇瓶种子的装量75～150ml/250ml或150～250ml/500ml培养基，往复式摇床振荡速度80～150次/分，或旋转式摇床振荡速度100～200转/分，培养温度24～28℃，培养时间2～3天，种子罐和发酵罐投料量50～70％，接种量8～10％，搅拌速度100～200rpm，通气量1∶0.5～1∶1v/vmin，发酵培养时间4～7天，随着发酵培养时间延长，培养基由混浊逐渐变清，发酵液中还原糖、氨态氮、PH都逐渐降低，菌丝体生物量不断增加，至第5～6天时多糖肽产量达最高时终止发酵；(3)灰树花多糖肽的生产方法灰树花发酵液用沙芯漏斗抽滤，分离发酵液和菌丝体，工厂可用板框机分离发酵液与菌丝体，将湿菌丝体加10～20倍水浸泡过夜，用90～100℃水浴回流提取2～5小时，过滤，将滤液浓缩后加2～5％倍的95％乙醇0～4℃沉淀8～10小时，干燥得灰树花多糖肽；本发明所述从腐木个经组织分离法得到的GF103菌种，短柄，呈珊瑚状分枝，末端生扇形至匙形菌盖，重叠成丛，大的丛宽40～60cm，菌盖直径2～7cm，灰色至浅褐色，菌盖表面有细毛，老后光滑，有反射性条纹，过缘薄，内卷，菌肉白，菌管长1～4mm，管孔延生，孔面白色至淡黄色，管口多角形，平均每毫米1～3个，孢子无色，光滑，卵圆形至椭圆形，菌丝壁薄，分枝，有横隔，无锁状联合，物理诱变所得的菌株GF103-21在固体木屑麸皮培养基上培养，其子实体形态与天然实体相同；本发明所述灰树花菌株GF103-21的培养性状是：①接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，温度24～28℃，生长旺盛，菌丝体纯白色、绒状，接种十天菌落直径达15-20mm，②接种在木屑培养基上，其培养特征如上所述，③在摇瓶振荡培养时，用往复式摇床，振荡速度80～150次/分，或旋转式摇床，振荡速度100～200转/分，形成菌株，当菌大量形成时，发酵液由混浊变清，粘度逐渐增加，散发浓郁果香味，④在发酵培养基中，培养5～6天时，菌丝体生长和多糖肽产量达到最高，可终止发酵。