[发明专利]高通量IgY抗体芯片构建技术

摘要

本发明是涉及一种IgY(Yolk Immunoglobulin)高通量蛋白芯片的制作技术，以及采用这种技术开发的四种蛋白质芯片产品。本发明采用候选抗原蛋白直接免疫母鸡；或将候选抗原cDNA构建cDNA真核表达质粒，再将DNA真核表达质粒免疫母鸡；收集鸡蛋，从蛋黄中分离纯化抗原特异的IgY抗体；利用玻片或多孔滤膜构建IgY蛋白芯片。由于IgY具有亲和力高(100倍以上)、与之结合的二抗多(3～5倍)、交叉反应小、不与蛋白A、G、哺乳动物抗体Fc段、补体等结合、耐酸耐热等优点，是构建蛋白芯片的最佳材料。本发明还应用该技术开发了白细胞分化抗原检测芯片、血清细胞因子检测芯片、血清肿瘤标志物检测芯片和心肌疾病早期预警芯片等产品。

主权项

1.一种IgY高通量蛋白芯片的构建方法，是一种采用抗原或直接采用cDNA制作鸟类特异性抗体并构建蛋白(抗体)芯片的技术，以及用此技术构建的蛋白芯片产品，可用于蛋白质组学的研究以及临床诊断试剂的开发。具体包括下述步骤：a)候选抗原蛋白的选择；b)或候选抗原基因cDNA或基因组DNA序列的选择；c)构建cDNA或基因组DNA真核表达质粒；d)DNA表达质粒转化、筛选、鉴定、扩增、提纯；e)将抗原蛋白或DNA真核表达质粒免疫母鸡等鸟类动物；f)收集鸡蛋或其他蛋，制备和纯化抗原蛋白特异的IgY抗体；g)利用玻片或多孔滤膜构建IgY蛋白芯片；h)IgY夹心法检测或直接标记法检测。