[发明专利]一种制备人载脂蛋白基因重组蛋白的方法有效
申请号: | 02136716.7 | 申请日: | 2002-08-29 |
公开(公告)号: | CN1478903A | 公开(公告)日: | 2004-03-03 |
发明(设计)人: | 周鸣南;龚邦强 | 申请(专利权)人: | 上海凯曼生物科技有限公司 |
主分类号: | C12P21/02 | 分类号: | C12P21/02;C12N15/09;C12N15/63 |
代理公司: | 上海开祺专利代理有限公司 | 代理人: | 费开逵 |
地址: | 20023*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明公开了一种人载脂蛋白ApoAIMilano二聚体肽的制备方法,它采用基因重组技术将人的ApoAIMilano基因克隆到表达载体上,构建成表达重组质粒,并转化进入大肠杆菌,组建成表达工程菌,经发酵、纯化工艺获得人ApoAIMilano蛋白,它可用于治疗急性动脉粥样硬化斑块形成而导致的心绞痛、心肌梗死等冠状动脉综合症。 | ||
搜索关键词: | 一种 制备 脂蛋白 基因 重组 蛋白 方法 | ||
【主权项】:
1、一种人载脂蛋白ApoAIMilano的制备方法,其特征在于1-1、采用RT-PCR技术从人肝细胞中获得人载脂蛋白基因片段;1-2、通过PCR直接位点突变的方法制得人载脂蛋白基因;1-3、将上述获得的人载脂蛋白基因克隆到PMD-T载体上,进行DNA序列测定,然后从PMD-T载体上切下,克隆到表达载体PMZG上,建成表达重组质粒pMZG-3,将此构建的表达人载脂蛋白重组质粒转化进入宿主菌大肠杆菌内,组建成工程菌;1-4、表达工程菌发酵、发酵液处理、纯化,得人载脂蛋白;1-5、纯化的人载脂蛋白用谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽处理,形成人载脂蛋白的二聚体肽。
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