[发明专利]一种光循环放大型生物芯片检测的方法

摘要

本发明公开了一种光循环放大型生物芯片检测的方法。该方法将酶循环和生物发光结合起来，通过NADH/NAD⁺氧化还原对在电极上的循环实现FMNH₂的积累，高度积累的FMNH₂与其他发光底物荧光素酶、长链的醛及氧气反应发出波长490nm的荧光，这种光维持时间长，光密度大。本发明不仅灵敏度高、成本低廉而且操作简单、适用于各类生物样品的分析，在高密度生物芯片及蛋白质芯片的开发方面有极好前景。

主权项

1、一种光循环放大型生物芯片检测的方法，包括下列步骤：A、将待检测的生物样品固定于芯片的反应室；B、将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸与黄素单核苷酸的特异性氧化还原酶标记于另一种能与上述受体识别并结合的生物样品；C、将步骤B中标记过酶的生物样品点样在芯片上与步骤A所固定的生物样品相应反应室内；D、将步骤A和步骤B中的两种生物样品的反应20至50℃下温育20至50分钟；E、用缓冲溶液和洗脱溶液洗脱非特异结合的生物样品然后再用去离子水洗涤；F、在上述芯片反应室内加入除去氧气的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、黄素单核苷酸以及电子介体的溶液，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、黄素单核苷酸在酶的催化下立刻生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和还原型黄素单核苷酸，在酶促反应的同时所生成的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸在芯片电极的作用下直接或通过电子介体二茂铁又还原成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；G、上述循环进行100至10000个之后还原型黄素单核苷酸积累，这时加入充氧的含有七个碳原子以上的醛和荧光素酶的反应溶液，发光反应开始并稳定持续0.01至8秒钟，反应进行的同时，用光分析仪器检测光信号；H、对信号进行分析，对待测生物样品进行定性和定量。