[发明专利]一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗的荧光定量PCR试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗的荧光定量PCR试剂盒，利用该试剂盒快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗的方法以及该试剂盒在快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗中的应用。该试剂盒及方法克服了传统和现代方法中存在的不足，可有效方便地对猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗进行定量检测以及对猪瘟兔化弱毒疫苗生产进行质量监控。

主权项

1、一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟弱毒疫苗的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒包括a)RNA裂解液，b)逆转录酶，c)RNA酶抑制剂，d)Taq DNA聚合酶，e)标准阳性模板，f)逆转录反应液和g)荧光定量反应液，其特征是：逆转录反应液含有反向引物，其序列为5′-ATCAGGTCGTACTCCCATCAC-3′，荧光定量反应液含有引物和荧光探针，引物为正向引物和反向引物，其序列分别为5′-TAGCCATGCCCATAGTAGG-3′和5′-ATCAGGTCGTACTCCCATCAC-3′，荧光探针序列为5′-TACAGGACAGTCGTCAGTAGTTCGACGTGA-3′，荧光探针5′端标记的荧光报告基团是FAM，3′端标记的荧光受体基团为ROX，标准阳性模板pGS是含有猪瘟兔化弱毒株5′端400个核苷酸片段插入pGEM-T载体构成的，且该载体可在大肠杆菌DH5α中增殖。