[发明专利]鼻咽癌相关基因NGX6表达产物的获取及抗体的制备

摘要

一种鼻咽癌相关基因NGX6表达产物的获取及抗体的制备。本发明采用多聚酶链式反应方法克隆NGX6基因蛋白编码序列，构建该基因的融合表达质粒，导入JM109的大肠杆菌中，IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达，SDS－PAGE电泳，Western blot鉴定，用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白，本发明据原核表达载体pEGX－3X的GST阅读框架设计引物，使NGX6基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致。NGX6是鼻咽癌发生和发展的重要的相关基因之一；它的表达产物蛋白质作用于鼻咽癌细胞，具有基因治疗意义；抗体可用于鼻咽癌诊断。

主权项

1.一种鼻咽癌相关基因NGX6表达产物的获取，采用多聚酶链式反应方法克隆NGX6基因蛋白编码序列，构建该基因的融合表达质粒，导入JM109的大肠杆菌中，IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达，SDS-PAGE电泳，Western blot鉴定，用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白，本发明据原核表达载体pEGX-3X的GST阅读框架设计引物，使NGX6基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致；其特征在于：以含NGX6基因的质粒为模板(0.1μg)，加入上述引物各10pmol进行扩增，回收PCR产物条带；用SmalI酶切PCR回收产物及pEGX-3X载体，产生匹配的粘末端；小胶回收试剂回收线性的4.9kb的载体，NGX6编码区片段；将pEGX-3X载体与NGX6基因连接，构建成符合阅读框的GST-NGX6融合基因；用含融合基因的pEGX-3X质粒转化大肠杆菌JM109，小量制备质粒DNA，SalI和NotI酶切鉴定是否含插入片段，含插入片段的阳性克隆质粒DNA纯化后用DNA自动测序仪测序。