[发明专利]小孢子成熟胚直接萌发成植株的制备方法

摘要

本发明公开了一种小孢子成熟胚直接萌发成植株的制备方法，首先是小孢子的制备，选取小孢子的新鲜花蕾，消毒，无菌水洗去消毒液，在培养基中挤压花蕾，过筛、离心收集小孢子；其次是小孢子胚的诱导，用培养基调小孢子密度，恒温培养；第三是小孢子胚的萌发，将根和子叶及一定长度的已分化完全的胚的根插入固体培养基中，光照培养一定时间后形成植株。本发明操作简单，萌发频率高，可广泛应用于植物育种和科学研究。

主权项

1、一种小孢子成熟胚直接萌发成植株的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：A、孢子的制备：选取小孢子处于单核晚期的新鲜花蕾，消毒，无菌水洗去消毒液，在B5培养基中轻轻挤压花蕾，使小孢子游离至培养基中，过筛除花蕾组织残渣，离心收集小孢子；B、小孢子胚的诱导：用NLN-13培养基调小孢子密度至1-2×105/mL，分装小孢子于培养皿中，28-35℃恒温暗培养12-16天，移至25-30℃，在光照为2-10μmol·s-1·m-2时，培养8-12天，再用NLN-0培养基稀释至300-400胚状体/3.5cm培养皿，弱光培养10-14天，形成小孢子胚；C、小孢子胚的萌发：将根和子叶，长度为6-8mm已分化完全的胚的根插入含附加氯化钙的MS固体培养基中，在28-35℃恒温，在光照为2-10μmol·s-1·m-2时，培养12-16天形成植株，其中培养基的组成是：MS常用培养基500毫升水500毫升氯化钙700-1000毫克蔗糖20-30毫克琼脂6-10毫克调PH至5.3-6.0。