[发明专利]蝰蛇蛇毒血凝酶的层析纯化方法

摘要

注射用蛇毒血凝酶的纯化工艺包括：蛇毒的溶解，亲和层析分离得到类凝血酶和类凝血激酶的粗溶液，超滤浓缩，离子交换层析纯化得到类凝血酶和类凝血激酶的纯溶液，超滤浓缩，凝胶层析获得类凝血酶和类凝血激酶的精纯溶液，最后将上述类凝血酶和类凝血激酶的精纯溶液按一定比例混合后，加入适量的赋形剂、稳定剂，经过滤、灌装、冷冻干燥、轧盖，最终获得注射用蛇毒血凝酶成品等工艺。本工艺采用专一性吸附剂，可以一次性地快速完成大量酶溶液的粗提制备工作，并能最大程度地收集到粗品中的有效成分，且生物活性高。所得注射用蛇毒血凝酶经动物药效学实验，全血凝血时间明显缩短，肝脏切口的失血量明显减少，多种毒素测定结果均为阴性。

主权项

1.一种注射用蛇毒血凝酶的层析纯化方法，其步骤包括：(1)将蝰蛇蛇毒用缓冲液溶解，离心去除沉淀；(2)用两种不同配体的高分辨率、高载量、专一性的吸附剂进行亲和层析，再用pH 7.0～9.0的0.01～0.05mol/L的tris-HCl缓冲液和NaCl溶液线性梯度洗脱，纯化得到类凝血酶和类凝血激酶的粗溶液；(3)浓缩类凝血酶和类凝血激酶的粗溶液，置冰箱中保存；(4)将所得类凝血酶和类凝血激酶的粗溶液分别经过阴离子交换柱层析，用pH 7.0～9.0的tris-HCl缓冲液和NaCl溶液线性梯度洗脱，纯化得到类凝血酶和类凝血激酶的纯溶液；(5)浓缩类凝血酶和类凝血激酶的纯溶液，置冰箱中保存；(6)将所得类凝血酶和类凝血激酶的纯溶液分别经过凝胶过滤柱层析，用pH 7.0～9.0的tris-HCl缓冲液洗脱，得到类凝血酶和类凝血激酶的精纯溶液；(7)将所得类凝血酶和类凝血激酶的精纯溶液按一定比例混合后得到混合液，每毫升含有1个克氏单位的血凝酶活性，再加入适量的赋形剂、稳定剂进行过滤、灌装、冷冻干燥、轧盖，即获得注射用蛇毒血凝酶成品。