[发明专利]一种复性蛋白质的方法

摘要

本发明涉及一种采用渗透质和疏水层析的组合系统复性蛋白质的方法。基本过程为将变性蛋白质采用高浓度盐和变性剂梯度吸附到疏水层析柱上，然后用一定浓度的渗透质洗脱，使蛋白质在洗脱过程中逐渐复性，正确折叠而形成天然活性蛋白质。本发明的方法不仅操作简便，便于大规模应用，而且可以获得高浓度的活性蛋白质并保持很高的蛋白回收率及活性回收率。

主权项

1.一种复性蛋白质的方法，利用疏水层析和渗透质的组合系统进行，包括如下步骤：(1)柱平衡：用流动相I平衡常规疏水层析介质；其中流动相I为盐浓度为0～4M的缓冲液、pH值2～7的缓冲液、含还原剂的缓冲液、变性剂～盐的梯度缓冲液、含盐浓度为0～4M和变性剂的缓冲液以及复性缓冲液；(2)变性蛋白质的吸附：用含0～200mM还原剂的4～10M脲或2～7M盐酸胍的变性缓冲液溶解包涵体或天然蛋白质，吸附到流动相I平衡的疏水层析柱上；(3)变性蛋白质的洗脱复性：步骤(2)中包涵体蛋白质溶解液或变性的天然蛋白质被上述选择的疏水介质吸附后，用流动相I冲洗0～5个柱体积，然后换流动相II和含1～70％(W/V或V/V)的渗透质的洗脱液冲洗层析柱；或蛋白质洗脱采用先运行0～10个柱体积的渗透质～变性剂或有机溶剂的梯度，使疏水柱中环境的亲水性由上至下依次增强，再改变梯度方向从0～10个柱体积的变性剂～渗透质梯度，然后一直用含渗透质的流动相II洗脱，使蛋白质解吸并逐渐形成天然结构；洗脱流速为0.1～1CV/min(CV为柱体积)；其中流动相II可以是pH值在7～9之间的复性缓冲液。