[发明专利]自身免疫病相关蛋黄抗体制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种自身免疫病相关蛋黄抗体尤其是针对于自身免疫病免疫原的蛋黄多克隆抗体IgY、抗独特型抗体和自身免疫病特异性表达抗原的制备方法，另外还涉及该蛋黄抗体的用途。本发明以产蛋禽类尤其是鸡作为免疫反应器，用一种或多种自身免疫病免疫原进行免疫注射，特点是多种自身免疫病免疫原单独或多种联合进行免疫注射，其产蛋中即有针对于上述自身免疫病免疫原的多克隆抗体IgY或抗独特型抗体或自身免疫病特异性表达抗原中的任一种或其组合物存在和储存。具有成本低、产量高、特异性强、决定簇广并能进行集约化大规模生产的优点，尤其是能避免HAMA反应和异质性问题。适用于自身免疫病的免疫诊断、治疗和预防。

主权项

1、一种自身免疫病相关蛋黄抗体制备方法，其特征在于：以产蛋禽类尤其是鸡作为免疫反应器，用一种或多种纯化或通过基因工程技术重组的自身免疫病特异性抗原或疫苗、或细胞因子靶向抗原、或自身免疫病特异性DNA或mRNA及其与相应载体组成的重组体、或针对于自身免疫病特异性抗原或细胞因子靶向抗原的单克隆或多克隆抗体、或它们的脂质体或纳米微粒复合物作为免疫原，分别单独进行或多种联合进行禽类尤其是鸡的多次重复免疫注射，然后再以不完全佐剂进行追加强化反应，待5-20天后禽类尤其是鸡的产蛋中即有针对于上述自身免疫病相关免疫原的多克隆抗体IgY、抗独特型抗体Ab2α、Ab2β、Ab2γ和Ab2ε、自身免疫病特异性表达抗原中的任一种或其组合物存在和储存。其具体步骤包括：a)自身免疫病相关免疫原或其组合物进行多次免疫注射禽类优选为鸡。在此所述的免疫原是采用纯化的自身免疫病相关抗原或通过基因工程技术重组的自身免疫病特异性抗原或疫苗、细胞因子靶向抗原、通过提取纯化的自身免疫病特异性裸DNA或mRNA及其与相应载体组成的重组体、自身免疫病特异性抗原和细胞因子靶向抗原的单克隆或多克隆抗体，另外还包括上述自身免疫病相关免疫原的脂质体微粒甚至是纳米微粒的免疫注射，借助于脂质体对组织和细胞的亲和性以强化免疫效果；所述禽类包括鸡、鸭、鹅、鹌鹑，首选是鸡；注射部位包括肌肉、皮下、皮内、血管和生殖腔囊；注射方法包括将上述自身免疫病相关免疫原单独进行注射和多种自身免疫病相关免疫原联合进行多次重复免疫注射，其中所述的多种自身免疫病相关免疫原联合进行免疫注射包括用不同种类和来源的自身免疫病相关抗原、基因重组自身免疫病特异性抗原或疫苗、细胞因子靶向抗原、自身免疫病特异性裸DNA或mRNA及其重组体中的任一种或其组合物；还包括不同种类和来源的自身免疫病相关抗原和细胞因子靶向抗原的特异性单克隆或多克隆抗体中的任一种或其组合物；所述的免疫原注射量为1-2ml(免疫原量10-500μg/ml+等量不完全福氏佐剂，其中抗体Ab1的用量为100～2000μg/ml+等量不完全福氏佐剂)；所述的自身免疫病相关抗原包括蛋白质、多肽、粘多糖、脂多糖、糖蛋白、细胞核、细胞质、细胞膜、细胞表面受体、核蛋白、DNA、RNA、线粒体、微粒体中的任一种或其组合；所述细胞因子靶向抗原包括人类白细胞分化抗原CD、粘附分子、补体、细胞因子及其受体、免疫球蛋白超家族中的任一种或其组合；所述细胞因子及其受体包括白细胞介素(IL)及其受体、集落刺激因子(CSF)及其受体、肿瘤坏死因子(TNF)及其受体、趋化因子及其受体中的任一种或其组合；所述自身免疫病包括多发性硬化症、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、混合结缔组织病、胰岛素依赖性糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、甲状腺功能亢进症、桥本甲状腺炎、干燥综合征等疾病中的任一种或其复合病。b)上述自身免疫病相关免疫原用不完全佐剂进行追加免疫反应。c)待5-20天后禽类尤其是鸡的产蛋中即有针对于上述自身免疫病相关免疫原的蛋黄抗体存在和储存。其中所述的蛋黄抗体包括针对于上述自身免疫病相关抗原、重组自身免疫病相关抗原或疫苗、细胞因子靶向抗原或其脂质体或纳米微粒的蛋黄多克隆抗体IgY中的任一种或其组合物；针对于自身免疫病特异性裸DNA或mRNA及其重组体或其脂质体或纳米微粒的自身免疫病特异性表达抗原中的任一种或其组合物；针对于自身免疫病相关抗原和细胞因子靶向抗原的特异性单克隆或多克隆抗体或上述蛋黄多克隆抗体IgY或其脂质体或纳米微粒的抗独特型抗体Ab2α、Ab2β、Ab2γ和Ab2ε中的任一种或其组合物。