[发明专利]一种重组人淋巴毒素α的构建与生产工艺

摘要

本发明的rhLT－α与天然分子相比，其N端缺失了27个氨基酸残基，本表明利用反转录PCR获得了目的基因序列，然后构建了高效重组表达载体，转化大肠杆菌获得高表达工程菌株，并建立了工程菌发酵、包涵体洗涤和复性、以及利用多种层析介质获得rhLT－α纯品的方法。纯化总收率高于40％，样品纯度高于99％，比活性与国际同类产品相当。因此本发明得到的工程菌和建立的纯化工艺适合于rhLT－α的大规模生产。

主权项

1.一种重组人淋巴毒素α(rhLT-α)的构建与生产工艺，主要包括：用RT-PCR的方法获得rhLT-α的cDNA，并将其克隆入原核表达载体，转化大肠杆菌获得工程菌株，工程菌通过一系列的发酵、粗纯和精制过程获得rhLT-α纯品，其特征在于：(1)rhLT-α与天然分子相比，N端缺失了27个氨基酸残基，包括附加上的第一个甲硫氨酸残基，整个分子共有145个氨基酸残基组成；(2)所用的原核表达载体带有T7启动子；(3)发酵培养基使用改良M9培养基或其它适合工程菌生长的培养基；(4)包涵体洗涤后用高浓度的尿素或盐酸胍增溶；(5)复性液使用Tris-HCl缓冲液或硼酸溶液；(6)相继用阴离子交换柱层析、Phenyl-Sepharose FF疏水柱层析和阴离子交换柱层析进行纯化。