[发明专利]一种筛选人组织相容性抗原(HLA)的T细胞表面抗原肽的体系,及其在制备MHC－抗原肽多聚体中的应用无效
| 申请号： | 02159974.2 | 申请日： | 2002-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN1511958A | 公开（公告）日： | 2004-07-14 |
| 发明（设计）人： | 徐小宁;王小宁 | 申请（专利权）人： | 王小宁 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N33/68;C07K14/435;C07K14/47;A61K38/17;A61P37/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510630广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属生物医药领域，是关于一种筛选人组织相容性抗原(HLA)的T细胞表面抗原肽的体系，及其在制备MHC－抗原肽多聚体中的应用。利用该组抗原肽制备的MHC－肽四聚体(MHC tetramer)可用于同种移植排斥反应的监测，并指导临床合理使用免疫抑制剂。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 组织 相容性 抗原 hla 细胞 表面抗原 体系 及其 制备 mhc 肽多聚体 中的 | ||
【主权项】：
1.一种筛选人组织相容性抗原(HLA)的T细胞表面抗原肽的方法，其包括以下步骤：(1)用iRNA技术制备表达不同HLA抗原(包括I类和II类抗原)的、内源性抗原肽提呈表达缺陷的T2样细胞系；(2)制备人主要及次要组织相容性抗原的肽链基因库；(3)利用步骤(2)制备的基因库，制备噬菌体肽展示体系；(4)把步骤(1)制备的T2样细胞系与步骤(3)制备的噬菌体混合；(5)洗涤去除不结合的噬菌体；(6)利用抗噬菌体衣壳蛋白抗体检测噬菌体结合的情况和条件；(7)用洗脱液进行梯度洗脱去除亲和性不高的噬菌体；(8)加入噬菌体敏感宿主大肠杆菌使T2样细胞上的噬菌体感染大肠杆菌，并得以扩增；(9)由大肠杆菌中进一步分离噬菌体质粒，并对其中的cDNA克隆测序、筛选出与MHC分子结合的肽段序列；(10)合成所筛选的肽段，结合至T2样细胞用该细胞刺激T细胞反应，确认肽段T细胞表位活性。
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