[发明专利]一种高效筛选T细胞抗原表达肽,制备MHC－肽多聚体(MHC tetramer)的体系无效
| 申请号： | 02159975.0 | 申请日： | 2002-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN1511959A | 公开（公告）日： | 2004-07-14 |
| 发明（设计）人： | 徐小宁;王小宁 | 申请（专利权）人： | 王小宁 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C07K16/44 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510630广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明采用内源性抗原肽提呈表达缺陷的T2样细胞系及带特殊报告基因的噬菌体肽展示体系建立了一种新的、高效筛选可与T细胞表面MHC分子结合的T细胞识别表位肽的技术体系。筛选的T细胞表位肽可用于制备有效的MHC－肽四聚体(MHC tetramer)，后者可用于各种条件下特异性T细胞的检测、分选和活化。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 筛选 细胞 抗原 表达 制备 mhc 肽多聚体 tetramer 体系 | ||
【主权项】：
1.一种高效筛选T细胞抗原表位肽，制备MHC-肽多聚体(MHC tetramer)的方法，其步骤如下：(1)用RNAi技术使细胞中TAP沉默，从而制备一系列具有不同MHC I、II类抗原位点的T2样细胞；(2)制备各种来源的表达9-15肽的cDNA；(3)将这些cDNA克隆到噬菌体展示系统中噬菌体表达载体中，cDNA/基因的聚合蛋白可提呈到噬菌体颗粒表面，并且与MHC分子结合；(4)将(3)步骤制备出的噬菌体与T2样细胞孵育，表面具有MHC分子结合能力的噬菌体结合到T2细胞表面；(5)通过不同强度的缓冲液洗涤，未结合的噬菌体被洗去，表达具有MHC分子结合活性的噬菌体留在T2样细胞表面；(6)加入噬菌体敏感宿主大肠杆菌使T2样细胞上的噬菌体感染大肠杆菌，并得以扩增；(7)由大肠杆菌中进一步分离噬菌体质粒，并对其中的cDNA克隆测序、筛选出与MHC分子结合的肽段序列；(8)合成所筛选的肽段，结合至T2样细胞用该细胞刺激T细胞反应，确认肽段T细胞表位活性；
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