[发明专利]多重PCR

摘要

本发明提供了用于核酸扩增，特别是能使多重扩增反应中的副产物的生长和扩增最小化的组合物和方法。本发明提供了线性扩增分子。第一个实施方案包含第一通用引物序列、第一模板同源性区、可切割位点、第二通用引物序列和第二模板同源性区。本发明还提供了将线性扩增分子用于核酸扩增的方法。第一个实施方案包含模板特异性杂交、线性扩增、模板特异性分子内杂交、链切割、第二次线性扩增和使用通用引物的指数扩增。

主权项

1.一种核酸扩增的方法，包括：(a)在支持特异性杂交的条件下，将线性扩增分子与核酸模板接触，(b)在与所述模板杂交的末端处向所述线性扩增分子顺序加入与所述模板中存在的相应核苷酸互补的一个或多个核苷酸，由此形成延伸的线性扩增分子，(c)在支持其特异性分子内杂交的条件下，孵育所述延伸的线性扩增分子，由此形成双链分子内杂交区，其中一条链包含在步骤(b)中新加入的核苷酸，(d)在预先确定的位点切割所述延伸的线性扩增分子，由此形成所述延伸的线性扩增分子的第一片段和第二片段；和由此所述第一片段与所述第二片段沿所述分子内杂交区接触；和(e)在由所述切割步骤新生成的末端向所述第一片段顺序加入与所述第二片段中存在的相应核苷酸互补的一个或多个核苷酸，由此形成延伸的第一片段。