[发明专利]构建分泌细菌重组蛋白的前导肽

摘要

本发明提供分离前导肽的方法，前导肽能指导异源蛋白质从细菌细胞质中输出。此方法取决于从推定前导肽或前导肽突变体的文库筛选可迅速输出的序列，因此能保护细胞质中短寿报告蛋白不受降解。本文鉴定的突变前导肽显示提供稳态水平显著更高的输出，不仅用于短寿报告蛋白，也用于其它稳定的长效蛋白质。这些前导肽可用于指导或提高蛋白质分泌。本发明进一步揭示经Tat途径输出细胞质折叠的蛋白质。具二硫键的蛋白质首先在适当氧化突变菌株的细胞质内折叠。这种细胞质预折叠的蛋白质含二硫键，随后经Tat途径输出。

主权项

1.一种鉴定指导细菌中蛋白质输出的前导肽的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：a)获得编码突变前导肽的核酸序列文库；b)构建表达盒集合，包括将编码突变前导肽的所述核酸序列置于编码短寿报告蛋白的核酸序列上游，其中所述短寿报告蛋白在细菌细胞质中被降解；c)在细菌中表达所述表达盒集合；d)测量所述细菌中所述报告蛋白的表达；以及e)收集细菌细胞，其所述报告蛋白的表达相对不表达前导肽的细菌增加，前导肽指导所述短寿报告蛋白的蛋白质输出，其中，所述报告蛋白表达增加的细胞中表达的突变前导肽是指导从细胞质输出的前导肽，由此所述输出使所述短寿报告蛋白在细胞质中不被降解。