[发明专利]用于受体激动剂激活的功能性分析无效
| 申请号： | 02826850.4 | 申请日： | 2002-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN1774630A | 公开（公告）日： | 2006-05-17 |
| 发明（设计）人： | 王国风;阿尔卡·V·施里克汉德 | 申请（专利权）人： | 辉瑞产品公司 |
| 主分类号： | G01N33/50 | 分类号： | G01N33/50 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 | 代理人： | 张平元;赵仁临 |
| 地址： | 美国康*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明提供一种新的用于激动剂激活受体的高通量功能分析，所述受体包括α1A、α2A、H1、5HT1A、5HT2A、D2和D3受体。本发明的分析方法使用提高的温度以及稳定表达所述受体和混杂G蛋白G1S的细胞系，其中用FluorometricImaging Plate Reader(FLIPR)监测激动剂－诱导的细胞内Ca2+释放。通过在升高的温度而不是在室温下进行分析，激动剂－诱导的反应强度显著地提高。本发明的新分析可用于筛选对治疗神经受体激活相关的失调的治疗有效的化合物。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 受体 激动剂 激活 功能 分析 | ||
【主权项】：
1.一种测定G-蛋白连接受体激动剂激活的分析方法，所述的方法使用Fluorometric Imaging Plate Reader，所述方法包括：(a)得到一种具有至少一种合适的筛选因子的细胞系，所述筛选因子选自药物抗性标记物，选自HEK293-Gα15，所述的细胞系稳定表达选自Gα15的混杂G蛋白，并在将编码选择的G-连接受体的cDNA转染到所述的细胞系中后，在所述的细胞系中共表达所述的G-连接的受体；(b)将共表达的细胞在合适的培养基中生长；(c)将所述的细胞铺板约1天；(d)使铺板的细胞荷载适合所述目的量的荧光染料；(e)将荷载染料的细胞在从约室温到约37℃的温度范围培养合适的一段时间；(f)用合适的缓冲液洗板以除去过量的染料并用近似体积的新鲜缓冲液替换去除的缓冲液体积；(g)在约30℃～约37℃培养；(h)在从约30℃～约37℃的恒定温度条件加入激动剂；并且(i)在从约30℃～约37℃的恒定温度条件在Fluorometric Imaging PlateReader中测定荧光发射，从而判断激动剂化合物对所选受体的激活水平。
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