[发明专利]一种肿瘤细胞药敏检测方法及其检测板

摘要

一种肿瘤细胞药敏检测方法及其检测板，属检测技术领域，用于解决目前检测中操作不标准、随意性大、不便检测的问题。其技术方案是，将检测分为预制检测板阶段和实验室检测阶段，预制检测板阶段是将抗肿瘤药物预先加入特制的检测板药检孔中，并予以冷冻固化，在检测时，将肿瘤细胞加入药检孔中，利用MTT法还原成有色沉淀，再进而制成有色溶液，经酶标仪测定后计算比较，求得药敏数值，作出判断。本发明可以使检测方法标准化、商品化，极大地简化了操作程序，提高了检测的准确性和稳定性，减少化疗中的盲目性，指导临床科学合理地用药，提高化疗的有效率。

主权项

1.一种肿瘤细胞药敏检测方法，其特征在于，它分为预制检测板阶段和实验室检测阶段，所述预制检测板阶段包含如下步骤：A.准备检测板：选用每块板上含有多排、每排设有多个药检孔的实验板作检测板，要求检测板无破损、污染和划痕；B.消毒：用环氧乙烷消毒；C.配置药物：选择常用抗癌药物，分别配置药物溶液，浓度以下列公式计算：浓度＝成人常规静脉用量/(成人标准体重×8％×1000)(％)；D.药物加入：每孔加入药物溶液10微升，全部药检孔加完后，将检测板盖盖上，放入灭菌容器内；E.固化：将装有检测板的容器放入冻干机内，真空冷冻4小时，将药检孔内的液体冻干成固体；F.包装：将检测板封装在铝箔袋内，加入干燥剂；所述实验室检测阶段包含如下步骤：G..标本留取外科手术切除肿瘤组织标本，取指尖大小，立即装入标本瓶内，若室温放置，应在2-6小时内检测完毕。H.标本预处理：祛除标本周围的非肿瘤组织和坏死组织，用缓冲液冲洗2-3次，剪碎成粒径不大于1毫米的碎块；I.制备肿瘤细胞悬液：将肿瘤组织碎块研磨过滤进入缓冲液溶液内，加入离心管内离心操作6-10分钟，弃去上清，用缓冲液混悬肿瘤细胞，再离心操作后弃去上清，将细胞混悬于DMEM培养基中，使细胞计数为5×105/ml。J.肿瘤细胞原代培养：将检测板预温至37℃，将DMEM培养基亦预温至37℃；每孔加细胞悬液200微升，轻轻摇荡混匀；37℃度、5％CO2孵箱内培养48小时；K.MTT还原每孔加入浓度为5mg/ml的MTT20μl，继续培养3-24小时，至形成蓝色针状结晶为止；L.检测：将检测板离心操作8-10分钟，弃去上清，用吸水纸吸去残液；每孔加入二甲亚砜100微升，轻轻摇荡混匀；用酶标仪检测各孔OD值；M.计算与判断：抑制率(IR)＝(1-给药孔平均OD值/对照孔平均OD值)×100％若：IR＞50％，判定为高度敏感；30％≤IR≤50％，判定为敏感；IR＜30％，判定为不敏感。