[发明专利]变性梯度凝胶电泳检验DNA聚合酶在PCR中的错配率

摘要

本发明涉及一种用于聚合酶链反应(PCR)的DNA聚合酶的错配率的检测方法。具体步骤如下：(1)选择特定的菌株作为实验用菌株；(2)对菌株进行纯化分离，挑单菌落液体培养菌体；(3)提取特定菌株的基因组DNA纯化后用作PCR反应的模板；(4)选择特异性引物，用不同的待检测的DNA聚合酶进行PCR扩增；(5)用变性梯度凝胶电泳对上述PCR产物进行分离；(6)电泳完毕后，染色，计数各样品条带的数目得出不同DNA聚合酶的错配率。这一发明对有些相关研究，特别是基因突变分析等对DNA聚合酶的要求很高的研究工作提供了检测DNA聚合酶的错配率的手段，为这类研究提供了一种保证实验正确性的方法。

主权项

1一种检测DNA聚合酶在聚合酶链反应PCR中对原始DNA模板序列扩增时的碱基错配率的方法，包括以下步骤：a)选择用于实验的生物材料--纯的微生物菌株；b)将用于步骤a)中的实验菌株经划线分离，单菌落的液体培养，菌体细胞的离心收集和菌株基因组DNA的提取后，获得该菌株的基因组DNA；c)将步骤b)获得的基因组DNA纯化后作为模板，选用特定引物进行PCR扩增；d)将步骤c)获得的PCR扩增产物作为样品，选择合适的电泳条件，在一定胶浓度和特定变性剂范围的变性胶中电泳；e)将步骤d)后的变性胶经染色液染色一段时间后，观察每个泳道的电泳条带数的多少；f)根据每样品的电泳条带数目来检测用于该样品的DNA聚合酶在PCR扩增过程中的错配率。