[发明专利]一种人与动物旋毛虫病的检测方法及试剂盒

摘要

一种人与动物旋毛虫病的检测方法及试剂盒，利用旋毛虫排泄分泌物(ES)抗原，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，检测人与动物旋毛虫病的抗体，通过抗原制备、抗原包被等方法制成检测试剂盒，本检测方法(试剂盒)在对人及动物旋毛虫病的检测，特异、敏感、简便快速，可检出1个虫体/每克肉，既适用于小批量屠宰又适用于大批量屠宰，30分钟内可判定结果，制作成本低廉，可确保阳性猪的100％检出。该发明克服了常规方法镜检法和集样消化法检测旋毛虫时存在的敏感性差，检验步骤繁琐等问题。从而大大地降低了工作量，该试剂盒还为人旋毛虫病的诊断提供了准确的诊断方法。

主权项

1、一种人与动物旋毛虫病的检测方法，其特征在于：利用旋毛虫排泄分泌物(ES)抗原，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，检测人与动物旋毛虫病的抗体，包括以下工艺流程：抗原制备：1)旋毛虫肌幼虫收集：采用国际旋毛虫标准虫种中国分离株ISS534制备抗原，取保种OF1小鼠，扑杀后，用人工胃液消化法收集肌幼虫，经口腔感染OF1小鼠，200-400条/只，30-40d后扑杀，以人工胃液消化法大量收集肌幼虫；2)旋毛虫排泄分泌物ES抗原制备：将人工胃液消化法收集的肌幼虫用细胞培养液充分洗涤，并于二氧化碳培养箱中培养；3)用自然沉淀法祛除虫体，收集培养液；4)将培养液用透析袋进行透析浓缩，祛除小分子蛋白；抗原包被：1)将ES抗原用碳酸盐缓冲液稀释；2)将稀释后的ES抗原包被96孔反应板，100μl/孔，4℃包被12-24h；3)用含0.05％吐温-20的洗涤液对反应板洗涤3次，30秒/次，每次洗涤后须甩干或拍干；4)用封闭液对反应板进行封闭，100-300μl/孔，37℃，1-3小时；5)用含0.05％吐温-20的洗涤液对反应板洗涤3次，30秒/次，每次洗涤后须甩干或拍干；6)对反应板进行真空干燥并进行真空包装。