[发明专利]动物狂犬病病毒糖／核蛋白“二价”DNA疫苗

摘要

本发明涉及一种动物狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗，是通过RT－PCR和克隆技术获得了狂犬病病毒SRV₉克隆株糖蛋白cDNA和核蛋白cDNA，以上述糖蛋白和核蛋白cDNA为目的基因，分别制备了以pVAX1和pIRES为载体的基因疫苗。将两种基因疫苗联合(“二价”)，以裸质粒形式或以司苯－甘油为佐剂形式免疫小鼠和犬3－4次后，免疫动物可产生良好的体液免疫和细胞免疫。该“二价”DNA疫苗无感染性，使用安全，免疫效果明确。是预防狂犬病的一种新型疫苗。

主权项

1、一种动物狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗，是以狂犬病病毒SRV9克隆株糖蛋白和核蛋白cDNA经以下步骤分别构建出以pVAX1和pIRES为载体的基因疫苗；(1)、从克隆载体pTG中通过Pst I和Xba I酶切将糖蛋白cDNA克隆入经相同酶切的pVAXl中，构建重组疫苗pVG；(2)、从克隆载体pTN2中用HindIII和Sma I酶切将核蛋白cDNA克隆入经HindIII和EcoRV酶切的pVAXl中，构建重组疫苗pVN；(3)、从克隆载体pVG用EcoR I和Xba I酶切将糖蛋白cDNA克隆入经EcoRV酶切的pIRES中构建重组表达载体pIG；(4)、从克隆载体pTN2中用Hinc II和Xba I酶切将核蛋白cDNA克隆入经Sma I和Xba I酶切的pIG中构建重组疫苗pIGN；(5)、将上述DNA疫苗经碱裂解法制备后，800～4000μg/ml溶于生理盐水中，按糖蛋白：核蛋白按25-100μg：25-100μg/100μl比例混合。