[发明专利]鳜鱼传染性脾肾坏死病毒基因诊断试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV，InfectiousSpleenandKidneyNecrosisVirus)的基因诊断试剂盒及检测方法。该试剂盒及检测方法是以根据鳜鱼传染性脾肾坏死病毒基因保守区序列设计的两对引物为主体而设计的。本发明采用聚合酶链式反应(PCR)技术，对传染性脾肾坏死病毒的特异性DNA核酸片段进行定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高。可运用于鳜鱼各时期养殖过程中的病毒跟踪检测，也可用于环境监测，避免病毒传播流行，提高科学管理效率，具有很高的实用价值。

主权项

1.一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的基因诊断试剂盒，其特征是该试剂盒包括下列部件：1).样品稀释液A液，2管，内装磷酸缓冲液(1×PBS)，pH7.4；2).模板抽提液B液，1管，内装酚/氯仿/异戊醇，比例为25∶24∶1；3).C液，1管，内装5MNaCL；4).D液，1管，内装无水乙醇；5).E液，1管，内装70％乙醇；6).F液，1管，内装灭菌双蒸水；7).PCR反应液G液，1管，内装PCR一扩反应液，包括ddH2O、含mg2+的10×Buffer、dNTP、外引物F1、外引物R1和TaqEF1为：5’-AGACCCACTTGTACGGCG，R1为：5’-CCCATGTCCAACGTATAGC；8).PCR反应液H液，1管，内装PCR二扩反应液，包括ddH2O、含mg2+的10×Buffer、dNTP、内引物F2、内引物R2和TaqE；F2为：5’-CGTGAGACCGTGCGTAGT，R2：5’-AGGGTGACGGTCGATATG；9).阳性对照I液，1管，内装ISKNV阳性DNA。10).盒子；11).一块泡沫板，其大小与上述盒子的底面相同，装于盒子中；泡沫板上有不少于上述小管数量的小孔，上述各小管分别对应放置于这些小孔中。