[发明专利]骨形态发生蛋白－2基因修饰的组织工程化骨的构建

摘要

本发明为骨形态发生蛋白－2基因修饰的组织工程化骨的构建与应用，涉及生物、医学领域。骨形态发生蛋白－2基因修饰的组织工程化骨的构建，涉及种子细胞分离培养与扩增，和载体处理与组织工程化人工骨的构建，以及一种在体内骨生成的方法。裸鼠皮下诱导成骨试验，复合BMSC的煅烧骨植入后3周，可见煅烧骨内表面有大量新骨形成。尤其适用于医学领域各种类型骨缺损的修复。

主权项

1，骨形态发生蛋白-2基因修饰的组织工程化骨的构建，涉及种子细胞分离培养与扩增，和载体处理与组织工程化人工骨的构建，其特征在于：所述种子细胞分离培养与扩增是从髂前上嵴上穿刺抽取骨髓，与肝素化的低糖a-MEM完全培养基混匀，接种于培养皿上，置于37℃、5％CO2培养箱孵育，3天后半量换液，一周后完全换液，以后每周更换培养基2次，约于12天，贴壁细胞几乎90％汇合，吸净培养基，以PBS冲洗2次，加入1ml0.05％胰蛋白酶(含0.02％EDTA)，置于37℃、5％CO2培养箱孵育5分钟，加入9ml低糖a-MEM完全培养基以中和胰蛋白酶的活性，用吸管轻轻吹打细胞使成单细胞悬液，按1∶3进行传代培养，95％汇合后用携带有人BMP-2基因的腺病毒感染；所述载体处理与组织工程化人工骨的构建是利用可吸收双相煅烧骨为细胞载体材料，其内表面经可溶性胶原涂层，植入前收集BMP-2基因转染后第3天的自体MSC，取总量为2×108细胞，用2ml无血清α-MEM制成细胞悬液，投入煅烧骨一颗，抽真空，将细胞悬液吸入煅烧骨中，37℃下培养4天。